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内容来源：中小站长动力网所属栏目：热点更新日期：2024-12-02

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【tg2059】拍手！！！撞肩！！！

浙江大学流式细胞分选技术分享大家好，今天我想和大家分享一些来自浙江大学生命科学研究院姬峻芳教授实验室的流式分析分选实验技术。这个实验室在细胞分选方面有着丰富的经验和独特的见解，我觉得非常值得大家参考和学习。分选前的准备工作 𐟧ꊊ首先，大家都知道，流式细胞分选是一种非常精确的技术，但有时候也会遇到一些挑战。比如，低含量的细胞分选可能会导致纯度不高和回收率低的问题。为了解决这个问题，实验室建议我们事先对感兴趣的细胞进行富集。富集的方式有两种：正选和负选。正选可以用磁珠法，而负选则可以利用nylon wool去除B细胞，或者用磁珠法去除不需要的细胞。分选时使用的管子 𐟓把在分选过程中，选择合适的管子也非常重要。上样一般使用5ml带盖流式管（BDFalcon tube #352003），而收集则可以使用14ml圆底离心管（BDFalcon tube #352059）或者5ml带盖流式管（Falcon tube #352003）。最多可以做到四路分选，非常方便。失败案例分析 𐟚늊在实验过程中，我们也遇到了一些失败案例。比如，有一次分选回来的细胞做表型实验时，发现细胞破碎，培养基里漂浮着细胞碎片，基本死亡。后来发现，这是因为细胞粘连严重，没有制备成单细胞悬液。即便通过喷嘴，细胞也会被切割力破坏。如果是HCC干性biomarker的检测，建议在细胞密度60-70%的时候收获较好。另一次失败是因为FITC通道分选得到的细胞，阴性里有阳性，阳性里有阴性。这可能是因为细胞浓度过高，上样过程中多次重新过滤吹打重悬，导致浓度不均，evt/s波动剧烈（1000-8000），这会严重影响FITC通道的结果，但对APC通道影响较小。参考文献 𐟓š 最后，给大家推荐几篇参考文献：[1]生研院-流式分选细胞注意事项 [2] 如何选择合适的流式抗体。希望这些信息对大家有所帮助！希望这些分享能对大家在流式细胞分选方面的实验有所帮助！如果有任何问题，欢迎大家留言讨论！

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