鱼饲料检测方法

HPLC检测饲料中孔雀石绿的方法孔雀石绿（malachitegreen）又称为苯胺绿、维多利亚绿或中国(China)绿，是一种具有金属光泽的绿色晶体。孔雀石绿的化学官能团三苯沼气(CH4)是一种致癌物资，且其易在鱼体内和情况中残留，存在致突变、致畸和致癌的危险，故我国、美国(UnitedStates)、加拿大(Canada)以及欧盟等很多国度均制止其在经济鱼类（欣赏鱼除外）和人类食用鱼中应用。鱼粉是饲猜中动物卵白的重要起源，具有孔雀石绿及其代谢物的鱼粉添加到饲猜中可经由进程食品链要挟到人类健康。

我所现采用NY/T1756-2023标准，应用高效液相色谱法（HPLC）对饲料中孔雀石绿进行测定，本标准合用于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料、鱼粉中孔雀石绿和无色孔雀石绿含量的测定。液相色谱法孔雀石绿和无色孔雀石绿的定量限均为10μg/kg；液相色谱-串联质谱法的定量限均为1.0μg/kg。现将该方法简要介绍如下：

1.原理以乙腈-乙酸钠缓冲溶液提取样品中的孔雀石绿和无色孔雀石绿，提取液通过二氯甲烷液液萃取，再经固相萃取柱净化，用接有二氧化铅柱的氰基柱进行高效液相色谱分离，紫外可见光检测器检测，外标法定量。

2.分析环节

2.1提取称取饲料样品约5g(精确到0.001g)，置于100ml离心管中，依次加入1.5ml盐酸羟胺溶液、2ml对甲苯磺酸溶液、5ml乙酸钠缓冲溶液和20ml乙腈，加入约2g酸性氧化铝，振荡2min，超声30min，4000r/min离心5min。将上清液转移至250ml分液漏斗中，向离心管中再次加入20ml乙腈，振摇2min，4000r/min离心5min，合并上清液至分液漏斗中。

2.2液液萃取加入50ml氯化钠溶液、50ml二氯甲烷，旋摇，静置分层。用蒸发瓶收集下层液体后，在分液漏斗再次加入20ml二氯甲烷，旋摇，静置分层，收集下层液体于同一蒸发瓶。将收集液35℃下减压旋转蒸发(注意：开始时温度不要直接升35℃，以免爆沸)至近干，加入5ml，乙腈溶解残渣，备用。

2.3净化

2.3.1固相萃取柱的活化按中性氧化铝柱在上、PRS柱在下的顺序将两柱串联，使用前用5ml乙腈预洗两柱。

2.3.2上样将2.3.1的样液缓慢转移到中性氧化铝柱内,在抽真空情况下过柱(保持流速1ml／min)。再用5ml乙腈洗涤蒸发瓶2次，洗涤液均转移至柱内，最后用5ml乙腈洗涤小柱。

2.3.3洗脱收集弃去中性氧化铝柱，用乙腈-乙酸钠缓冲溶液2ml、盐酸羟胺甲醇溶液lml洗脱，收集洗脱液，过膜(孔径0.45μm)，上机测定。

2.4样品测定

2.4.1色谱条件

色谱柱：氰基柱，250mm×4.6mm，柱后氧化铅柱：35mm×4.6mm。流动相：乙腈＋乙酸钠缓冲溶液＝60＋40(v＋v)；

流速：1.0ml/min。

柱温：室温。

进样量：50μl。

检测波长：600nm。

2.4.2定量测定按高效液相色谱仪说明书调整仪器操作参数。向液相色谱仪中注入孔雀石绿和无色孔雀石绿标准工作液及试样溶液，得到色谱峰面积响应值，用外标法定量。

1氯霉素类药物概述

氯霉素类药物是应用广泛的广谱抗生素，常用于动物各种传染性疾病的治疗中，对各类家禽、家畜、水产品及蜂蜜制品各种传染性疾病的控制和治疗起重要作用。氯霉素最初是从委内瑞拉链丝菌的培养液中提取制得，现在基本使用化学合成法大量生产。其性质稳定，在干燥状态下可保存药效达2年以上，易溶于有机溶剂，25℃时100ml水中仅溶解25mg。水溶液呈中性，在酸性和中性溶液中较稳定，遇碱类易分解失效。其合成品具有左旋光性，也称左霉素。

2氯霉素残留对人类健康的危害

2.1骨髓造血机能紊乱

氯霉素对骨髓造血机能有克制作用，可引起血小板减少性紫癜、粒细胞缺少症、再生障碍性贫血、溶血性等，多数在长期或多次用药的过程中发生。

2.2对早产儿和新生儿的毒性

在早产儿和新生儿肝内有些酶系统发育尚不完全，葡萄糖醛酸结合的能力较差，因此影响氯霉素在肝中的解毒作用；此外，肾脏排泄能力亦较弱，能招致药物蓄积中毒。

2.3胃肠道症状、口部症状

胃肠道反映重要有腹胀、腹泻、食欲减退，恶心、呕吐则少见。口部症状如口腔粘膜充血、疼痛、糜烂、口角炎和舌炎等。

2.4其它不良反映

可引起视神经炎、视力障碍、多发性神经炎、神经性耳聋以及严重失眠。有时发生中毒性精神病，重要表现为幻视、幻听、定向力丧失、精神失常等。

3氯霉素残留对我国动物产品出口的影响

氯霉素残留问题已引起国际组织和世界上许多国家和地区的高度重视。欧盟、美国等均在法规中规定氯霉素残留限量标准为“零允许量”，即不得检出。

几年来，我国出口到欧盟、美国等地区的水产品、蜂蜜等多次由于氯霉素超标被限制，损失达成数十亿美元。

4氯霉素残留检测方法

近年来各种关于氯霉素残留的检测方法不断涌现，大体可分为三大类：第一类是生物测定法，第二类是理化分析法，第三类是兼有生物和化学的酶联免疫检测法。

4.1筛选检查方法

在实际工作中，不也许也没必要对所有动物性水产品进行各种复杂、昂贵且耗时的分析检测。为能快速拟定动物食品中是否有氯霉素残留，通常做法是遵循一定程序，对被测产品进行取样，按规范规定对样品进行筛选检查，对筛选为阳性的样品再用更精确的方法进行定量鉴定。

4.1.1微生物法

在快速筛选检查程序中，微生物法非常有效，这类方法简朴、费用少、速度快，因而广泛用于动物性食品兽药残留的初筛。

棉签法

棉签法又称现场拭子法，是检测动物体中抗生素残留的现场实验方法。

该方法是用棉签（拭子）采用动物体内的组织液，然后将其放置于涂满枯草杆菌的培养基中保温过夜。观测是否在拭子周边出现抑菌环，若有，即表白组织液中有抗生素存在。假如该动物仅用氯霉素进行过治疗，则可以认为该组织中存在氯霉素残留。此方法在几分钟内即可完毕取样操作，16～18h即可获得结果，是简便易行而又有一定准确性的检测方法，比较适合基层现场筛选检测。但是该检测法灵敏度较差，检出限较高，多在μg/g级，特异性差，一般抗生素类药物都有此类反映，并且不能定量。

杯碟法

样品经解决后，注入牛津杯中，与含菌液的检定平板贴合，培养后，根据抑菌圈有无及大小鉴定结果。采用不同的实验菌种，可检测不同的抗生素。此法检出限为0.25μg/g。

这种方法与棉签法相比，灵敏度高，可以排除一定的干扰，但要进一步提高灵敏度很困难。

4.1.2免疫分析方法

免疫分析是以抗原与抗体的特异性、可逆性结合反映为基础的新型分析技术。免疫反映具有很高的选择性和灵敏性，因此，免疫分析技术无论作为兽药残留分析的检测手段还是样本净化方法都能使分析过程特别是前解决环节大大简化。作为相对独立的检测方法，即基于竞争结合分析原理的免疫测定法，涉及酶联免疫吸附测定（ELISA）、放射免疫测定（RIA）、固相免疫传感器等。

目前使用最普遍的酶联免疫法（ELISA），具有操作简便、灵敏度高、样品容量大、仪器化限度和分析成本低的优点，是目前最抱负的残留筛选性分析方法之一。

ELISA是基于抗原和抗体反映而建立的。由于氯霉素是半抗原，不能刺激机体产生抗体。要使半抗原性物质具有免疫原性,就需使其与大分子载体物质(蛋白质)相结合制备人工抗原,而后将其作为抗原进行使用,动物体内即可产生相应特异性的抗氯霉素的抗体,在此基础上建立酶联免疫竞争法测定氯霉素含量。

此种方法灵敏度高，检测下限可达0.05μg/kg，重现性好，回收率高，在1μg/kg的添加水平下，回收率可达107%～113%。

酶联免疫法的缺陷在于影响因素较多,易出现大量假阳性结果;抗体批次不同,测定结果也会出现差异。

4.2定量确认方法

4.2.1高效液相色谱法

高效液相色谱法检测氯霉素是一种灵敏度较高、可靠性较强的一种方法，此法反复性好、假阳性少，可以进行定量鉴定，但检出限较高，为5～10μg/kg，回收率偏低。由于动物体内成分复杂，一些杂质干扰测定，应用该法检测时，对于样品预解决必须仔细谨慎，以提高测定准确性和灵敏度。

4.2.2气相色谱法

目前较常用的氯霉素确证方法是气相色谱法,该方法的特点是高分离效能、高选择性、高灵敏度、检出限低、快速、应用广,还可用于制备高纯物质。它可以对于分派系数相差很近的组分进行分离,从而分离出极为复杂的混合物。检出限一般为μg/kg级,常用于抗生素药物残留的检测。但是大多数兽药极性或沸点偏高,需繁琐的衍生化步聚,因而限制了气相色谱法的应用。

饲料中氯霉素含量的检测目前采用气相色谱法。该方法先将配合饲料用乙酸乙酯提取，取部分提取液用氮气吹去乙酸乙酯后，残渣用甲醇/氯化钠溶液溶解，用正己烷液－液萃取除去油脂及脂溶物，氯霉素再用乙酸乙酯提取、吹干，C18小柱净化，经衍生剂衍生后用配有电子捕获检测器的气相色谱检测。气相色谱条件如下。

载气：氮气1.5ml/min；补充气：氮气25ml/min；分流比：1：10。温度：气化室280℃；检测器300℃；柱箱230℃。

在上述仪器条件下，注入标准工作液1μl，调整试样定容体积使试样溶液中氯霉素的峰值与标准工作液中氯霉素峰值相近，以保存时间和峰值的比较对氯霉素进行定量计算。反复性：两个平行测定的结果相对偏差不得大于5％。回收率：添加量在0.01mg/kg时，回收率在90%~105%。该方法的最低检出限为0.005mg/kg。

5结论

总的来说，基于抗原抗体特异性反映建立起来的免疫学测定方法灵敏度较高，特异性强，试样预解决简朴，分析时间短。近几年酶联免疫法得到了很大的发展,假阳性率明显减少,并且适应广泛。目前在肉类、鱼虾、蛋品、尿液、血清、牛奶、蜂蜜及饲料中都用酶联免疫法来做氯霉素检测的筛选。

国际上公认的定量确认方法仍是理化分析法，重要是气相色谱法和液相色谱法，这两种方法灵敏度高，结果准确，反复性好，假阳性少，缺陷是样品前解决过程复杂、仪器化限度高且价格昂贵，分析速度慢。两者相比较，由于HPLC检出限较高，已逐渐不能满足发达国家对检测方法检出限的规定。联用技术出现后，LC-MS由于灵敏度高,检出限更低,结果精确可靠,在氯霉素残留的分析中正逐渐代替单一的色谱技术。

饲料中铅的测定方法GB13080—1991主题内容与合用范围本标准规定了饲料中铅的测定。本标准合用于饲料原料（磷酸盐、石粉、鱼粉等）、配合饲料（涉及混合饲料）中铅的测定。原理样品经消解解决后，再经萃取分离，然后导入原子吸取分光光度计中，原子化后测量其在283.3nm处的吸光度，与标准系列比较定量。试剂和溶液除特殊规定外，本标准所用试剂均为分析纯，水为去离子重蒸馏水或相应纯度的水。硝酸，优级纯。硫酸，优级纯。高氯酸，优级纯。盐酸，优级纯。甲基异丁酮[CH3COCH2CH（CH3）2，HG3－1118]。6mol/L硝酸溶液：量取38mL硝酸，加水至100mL。1mol/L碘化钾溶液：称取166g碘化钾（KI，GB1272），溶于1000mL水中，储存于棕色瓶中。1mol/L盐酸：量取84mL盐酸，加水至1000mL。5%抗坏血酸溶液：称取5.0g抗坏血酸（C6H8O6），溶于水中，稀释至100mL，储存于棕色瓶中。铅标准储备液：精确称取0.1598g硝酸铅（HG3—1070），加6mol/L硝酸10mL，所有溶解后，转入1000mL容量瓶中，加水至刻度，该溶液为每毫升0.1mg铅。铅标准工作液：精确吸取1mL铅标准储备液，加入100mL容量瓶中，加水至刻度。此溶液为每毫升1μg铅。仪器、设备消化设备：两平行样所在位置的温度差小于或等于5℃。马福炉。分析天平；感量0.0001g。实验室用样品粉碎机。振荡器。原子吸取分光光度计。容量瓶：25、50、100、1000mL。吸液管：1、2、5、10、15mL。消化管。瓷坩埚。试样制备采集具有代表性的饲料样品，至少2kg，四分法缩分至250g，磨碎，过1mm孔筛，混匀，装入密闭容器中，低温保存备用。测定环节试样解决配合饲料及鱼粉试样解决称取4g样品，精确到0.001g，置于瓷坩埚中缓慢加热至炭化，在500℃高温下加热18h，直至试样呈灰白色。冷却，用少量水将炭化物湿润，加5mL硝酸，5mL高氯酸，用表面皿盖住，在砂浴或加热装置上加热，待消解完全后，去掉表面皿，至近干涸。加10mL1mol/L盐酸，使盐类溶解，把溶液倒入50mL容量瓶中，用水冲洗烧杯多次，加水至刻度。用中速滤纸过滤，待用。磷酸盐、石粉试样解决称取5g样品，精确到0.001g，放入消化管中，加入5mL水，使样品湿润，依次加入20mL硝酸，5mL硫酸，置4h后加入5mL高氯酸，放在消化装置上加热消化。在150℃恒温消化2h，然后将温度缓缓升到300℃，在300℃下恒温消化，直至样品发白近干为止，取下消化管，放冷。加入1mol/L盐酸10mL，在150℃温度下加热，使样品中盐类溶解后将溶液倒入50mL容量瓶中，用水冲洗消化管，将冲洗液并入容量瓶中，加水至刻度。用中速滤纸过滤，备作原子吸取用。标准曲线给制精确吸取0、4、8、12、16、20mL1μg/mL的铅标准工作液，加到25mL容量瓶中，加水至20mL。准确加入2mL1mol/L碘化钾溶液，振动摇匀；加入1mL抗坏血酸溶液，振动摇匀；准确加入2mL甲基异丁酮溶液，剧烈振动3min，静置萃取后，将有机相导入原子吸取分光光度计。在283.3nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。测定精确吸取5mL～10mL样品溶液和试剂空白液加入到25mL容量瓶中，按绘制标准曲线环节进行测定，测出相应吸光值和标准曲线比较定量。测定结果计算公式((A1－A2)×1000m×1000×V2/V1X＝＝V1(A1－A2)mV2………（1） 式中：X――试样中铅的含量，mg/kg； m――试样质量，g；V1――试样消化液总体积，mＬ；V2――测定用试样消化液体积，mＬ。A1――测定用试样消化液铅含量，μg；A2――空白试液中铅含量，μg。结果表达每个试样取2个平行样进行测定，以其算术平均值为结果，结果表达成0.01mg/kg。

（规范性附录）

饲料中汞的测定方法GB13081－1991主题内容与合用范围本标准规定了饲料中汞的测定方法。本标准合用于各类饲料中汞的测定。原理在原子吸取光谱中，汞原子对波长为253.7nm的共振线有强烈的吸取作用。试样经硝酸－硫酸消化使汞转为离子状态，在强酸中，氯化亚锡将汞离子还原成元素汞，以干燥清洁空气为载体吹出，进行冷原子吸取，与标准系列比较定量。试剂和溶液除特殊规定外，本标准所用试剂均为分析纯，水为重蒸馏水或相应纯度的水。硝酸。硫酸。30％氯化亚锡溶液：称取30g氯化亚锡（GB638），加少量水，再加2mL硫酸使溶解后，加水稀释至100mL，放置冰箱备用。混合酸液：量取10mL硫酸，加入10mL硝酸，慢慢倒入50mL水中，冷后加水稀释至100mL。汞标准储备液：准确称取干燥器内干燥过的二氯化汞0.1354g，用混合酸液溶解后移入100mL容量瓶中，稀释至刻度，混匀，此溶液每毫升相称于1mg汞，冷藏备用。汞标准工作液：吸取1.0mL汞标准储备液，置于100mL容量瓶中，加混合酸液稀释至刻度，此溶液每毫升相称于10μg汞。再吸取此液1.0mL，置于100mL容量瓶中，加混合酸液稀释至刻度，此溶液每毫升相称于0.1μg汞，临用时现配。仪器、设备分析天平：感量0.0001g。实验室用样品粉碎机或研体。消化装置。测汞仪。三角烧瓶：250mL。容量瓶：100mL。还原瓶：50mL（测汞仪附件）。试样制备采集具有代表性的饲料样品，至少2kg，四分法缩分至250g，磨碎，过1mm孔筛，装入密闭容器，低温保存备用。测定环节试样解决称取1g～5g试样，精确到0.001g，置于三角瓶中，加玻璃珠数粒，加25mL硝酸，5mL硫酸，转动三角瓶防止局部炭化，装上冷凝管，小火加热，待开始发泡即停止加热，发泡停止后，再加热回流2h。放冷后从冷凝管上端小心加20mL水，继续加热回流10min，放冷，用适量水冲洗冷凝管，洗液并入消化液。消化液经玻璃棉或滤纸滤于100mL容量瓶内，用少量水洗三角烧瓶和滤器，洗液并入容量瓶内，加水至刻度，混匀。取试样解决时相同量的硝酸、硫酸，同法做试剂空白实验。若为石粉，称取约1g试样，精确到0.001g，置于三角烧瓶中，加玻璃珠数粒，装上冷凝管后，从冷凝管上端加入15mL硝酸，用小火加热15min，放冷，用适量水冲洗冷凝管，移入100mL容量瓶内，加水至刻度，混匀。标准曲线绘制吸取0、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50mL汞标准工作液（相称于0、0.01、002、0.03、0.04、0.05μg的汞），置于还原瓶内，各加10mL混合酸液，加2mL氯化亚锡溶液后立即盖紧还原瓶2min，记录测汞仪读数指示器最大吸光度。以吸光度为纵坐标，汞浓度为横坐标，绘制标准曲线。测定加10mL试样消化液于还原瓶内，加2mL氯化亚锡溶液后立即盖紧还原瓶2min，记录测汞仪读数指示器最大吸光度。测定结果计算公式（（A1－A0）×1000m×1000×V2/V1X=V1(A1－A0)mV2＝式中：X―――试样中汞的含量，mg/kg； A1―――测定用试样消化液中汞的质量，μgA0―――试剂空白液中汞的质量，μgm―――试样质量，g；V1―――试样消化液总体积，mL；V2―――测定用试样消化液体积，mL。结果表达 每个试样平行测定2次，以其算术平均值为结果。 结果表达成0.001mg/kg。

（规范性附录）

饲料中镉的测定方法GB13082—1991主题内容与合用范围本标准规定了饲料中镉的测定方法。本标准合用于饲料中镉的测定。原理以干灰化法分解样品，在酸性条件下，有磺化钾存在时，镉离子与碘离子形成络合物，被甲基异丁酮萃取分离，将有机相喷入空气—乙炔火焰，使镉原子化，测定其对特性共振线228.8nm的吸光度，与标准系列比较而求得镉的含量。试剂和溶液除特殊规定外，本标准所用试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。硝酸，优级纯。盐酸，优级纯。2mol/L碘化钾溶液：称取332g碘化钾，溶于水，加水稀释到1000mL。5%抗坏血酸溶液：称取5g抗坏血酸，溶于水，加水稀释至100mL（临用时配制）。1mol/L盐酸溶液：量取10mL盐酸，加入110mL水，摇匀。甲基异丁酮[CH3COCH2CH（CH3）2，HG3-1118]。镉标准储备液：称取高纯金属镉（Cd，99.99%）0.1000g于250mL三角烧瓶中，加入10mL1:1硝酸，在电热板上加热溶解完全后，蒸干，取下冷却，加入20mL1:1盐酸及20mL水，继续加热溶解，取下冷却后，移入1000mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，此溶液每毫升相称于100μg镉。镉标准中间液：吸取10mL镉标准储备液于100mL容量瓶中，以1mol/L盐酸稀释至刻度，摇匀，此溶液每毫升相称于10μg镉。镉标准工作液：吸取10mL镉标准中间液于100mL容量瓶中，以1mol/L盐酸稀释至刻度，摇匀，此溶液每毫升相称于1μg镉。仪器、设备分析天平；感量0.0001g。马福炉。原子吸取分光光度计。硬质烧杯：100mL。容量瓶：50mL具塞比色管：25mL。吸量管：1、2、5、10mL。称液管：5、10、15、20mL。试样制备采集具有代表性的饲料样品，至少2kg，四分法缩分至约250g，磨碎，过1mm筛，混匀，装入密闭广口试样瓶中，防止试样变质，低温保存备用。测定环节试样解决准确称取5g～10g试样于100mL硬质烧杯中，置于马福炉内，微开炉门，由低温开始，先升至200℃保持1h，再升至300℃保持1h，最后升温至500℃灼烧16h，直至试样成白色或灰白色，无碳粒为止。取出冷却，加水润湿，加10mL硝酸，在电热板或砂浴上加热分解试样至近干，冷后加10mL1moL/L盐酸溶液，将盐类加热溶解，内容物移入50mL容量瓶中，再以1mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀备用。若为石粉、磷酸盐等矿物质试样，可不用干灰化法，称样后，加10mL～15mL硝酸（或盐酸），在电热板或砂浴上加热分解试样至近干，其余同上解决。标准曲线绘制精确分取镉标准工作液0、1.25、2.50、5.00、7.50、10.00mL，分别置于25mL具塞比色管中，以1mol/L盐酸溶液稀释至15mL，依次加入2mL碘化钾溶液，摇匀，加1mL抗坏血酸溶液，摇匀，准确加入5mL甲基异丁酮，振动萃取3min～5min，静置分层后，有机相导入原子吸取分光光度计，在波长228.8nm处测其吸光度，以吸光度为纵坐标，深度为横坐标，绘制标准曲线。测定准确分取15mL～20mL待测试样溶液及同量试剂空白溶液于25mL具塞比色管中，依次加入2mL碘化钾溶液，其余同标准曲线绘制测定环节。测定结果计算公式(A(A1-A2)mV2/V1X＝＝V1(A1-A2)mV2………（1） 式中：X――试样中镉的含量，mg/kg；A1―――待测试样溶液中镉的含量，μg；A2―――试剂空白溶液中镉的含量，μg。 m――试样质量，g；V2―――待测试样溶液体积，mＬ；V1―――试样解决液总体积，mＬ。结果表达每个试样取2个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。结果表达成0.01mg/kg。饲料中总砷的测定GB/T13079－1999范围本标准规定了饲料中总砷的测定方法。本标准合用于各种配（混）合饲料、浓缩饲料、预混合饲料及饲料原料。原理样品经酸消解或干灰化破坏有机物，使砷呈离子状态存在，经碘化钾、氯化亚锡将高价砷还原为三价砷，然后被锌粒和酸产生的新生态氢还原为砷化氢。在密闭装置中，被二乙氨基二硫代甲酸银（Ag－DDTC）的三氯甲烷溶液吸取，形成黄色或棕红色银溶胶，其颜色深浅与砷含量成正比，用分光光度计比色测定。形成胶体银的反映如下：AsH3+6Ag（DDTC）=6Ag+3H（DDTC）+As（DDTC）3试剂除特殊规定，所用的试剂均为分析纯，水系蒸馏水或相应纯度的水。硝酸硫酸高氯酸盐酸抗坏血酸无砷锌粒，粒径3.0mm±0.2mm.。混合酸溶液（A）：HNO3:H2SO4:HCIO4＝23:3:4乙酸铅棉花：将医用脱脂棉在乙酸铅溶液（100g/L）中浸泡约1h，压除多余溶液，自然晾干，或在90℃～100℃烘干，保存于密闭瓶中。二乙氨基二硫代甲酸银（Ag－DDTC）－三乙胺－三氯甲烷吸取溶液：2.5g/L。称取2.5g（精确到0.0002g）Ag－DDTC于干燥的烧杯中，加适量三氯甲烷待完全溶解后，转入1000mL容量瓶中，加入20mL三乙胺，用三氯甲烷定容，于棕色瓶中存放于冷暗处。若有沉淀应过滤后使用。3.10砷标准储备溶液：1.0mg/mL精确称取0.660g三氯化二砷（110℃下干燥2h），加5mL氢氧化钠溶液（200g/L）使之溶解，然后加入25mL硫酸溶液（60mL/L）中和，定容至500mL。此溶液每毫升含1.00mg砷，于塑料瓶中冷贮。砷标准工作溶液：1.0μg/mL。准确吸取5.00mL砷标准储备液（3.10）于100mL容量瓶中，加水定容，此溶液含砷50/mL。准确吸取50μg/mL砷标准溶液2.00mL，于100mL容量瓶中，加1mL盐酸，加水定容，摇匀，此溶液每毫升相称于1.0砷。硫酸溶液：60mL/L。吸取6.0mL硫酸，缓慢加入约80mL水中，冷却后用水稀释至100mL。盐酸溶液：Ｃ（HCI）＝1mol／Ｌ。量取84.0mL盐酸（3.4），倒入适量水中，用水稀释至1Ｌ。盐酸溶液：Ｃ（HCI）＝3mol／Ｌ。将1份盐酸与3份水混合。硝酸镁溶液：150g/L。称取30g硝酸镁〔Mg（HNO3）2·6H2O〕溶于水中，并稀释至200mL。碘化钾溶液：150g/L。称取75g碘化钾溶于水中，定容至500mL，贮存于棕色瓶中。酸性氯化亚锡溶液：400g/L。称取20g氯化亚锡（SnCI2·2H2O）溶于50mL盐酸中，加入数颗金属锡粒，可用一周。氢氧化钠溶液：200g/L。乙酸铅溶液：200g/L。设备砷化氢发生及吸取装置。砷化氢发生器：100mL带30mL、40mL、50mL刻度线和侧管的锥形瓶。导气管：管径为8.0mm～8.5mm；尖端孔为2.5mm～3.0mm。吸取瓶：下部带5mL刻度线。分光光度计：波长范围360nm～800nm。分析天平：感量0.0002g。可调温电炉：六联和二联各一个。玻璃器皿：凯氏瓶，各种刻度吸量管，容量瓶和高型烧杯。瓷坩锅：30mL。高温炉：温控0～950℃。分析环节样品制备选择有代表性样品1.0kg，用四分法缩减至250g，过0.42mm孔筛，存于密封瓶中，待用。混合酸消解法配合饲料及植物性单一饲料，宜采用硝酸－硫酸－高氯酸消解法。称取试样3g～4g（精确至0.001g），置于250mL凯氏瓶中，加水少许湿润试样，加30mL混合酸（Ａ），放置4h以上或过夜，置电炉上从室温开始消解。待棕色气体消失后，提高消解温度，至冒白烟（SO3）数分钟（务必赶尽硝酸），此时溶液应清亮无色或淡黄色，瓶内溶液体积近似硫酸用量，残渣为白色。若瓶内溶液呈棕色，冷却后添加适量硝酸和高氯酸，直到消解完全。冷却，加10mL盐酸溶液（3.13）并煮沸，稍冷，转移到50mL容量瓶中，洗涤凯氏瓶3～5次，洗液并入容量瓶中，然后定容，摇匀，待测。试样消解液含砷小于10时，可直接转移到砷化氢发生器中，补加7mL盐酸，加水使瓶内溶液体积为40mL，从加碘化钾起以下按5.3操作环节进行。盐酸溶样法磷酸盐、碳酸盐和微量元素添加剂不宜加硫酸，应用盐酸溶样。称取试样1g～3g（精确至0.0002g）于100mL高型烧杯中，加水少许湿润试样，慢慢滴加10mL盐酸溶液（3.14），待剧烈反映过后，再缓慢加入8mL盐酸，用水稀释至约30mL，煮沸。转移到50mL容量瓶中，洗涤烧杯3～4次，洗液并入容量瓶中，定容，摇匀，待测。试样消解液含砷小于10时，可直接在发生器中溶样，用水稀释到40mL并煮沸，从加碘化钾起以下按5.3操作环节进行。此外，少数矿物质饲料富含硫，严重干扰砷的测定，可盐酸溶解样品后（5.1.2），往高型杯中加入5mL乙酸铅溶液（3.19）并煮沸，静置20min，形成的硫化铅沉淀过滤除之，滤液定容至50mL，以下按5.3规定环节进行。干灰化法预混料、浓缩饲料（配合饲料）可选择干灰化法。称取试样2g～3g（精确至0.0002g）于30mL瓷坩埚中，低温炭化至无烟后，加入5mL硝酸镁溶液（3.15），混匀，于低温或沸水浴中蒸干，然后转入高温炉于550℃恒温灰化3.5h～4.0h。取出冷却，缓慢加入10mL盐酸溶液（3.14），待剧烈反映过后，煮沸并转移到50mL容量瓶中，洗涤坩埚3～5次，洗液并入容量瓶中，定容，摇匀，待测。所称试样含砷小于10时，可直接转移到发生器中，补加8mL盐酸，加水至40mL左右，加入1g抗坏血酸溶解后，按5.3操作环节进行。同时于相同条件下，做试剂空白实验。标准曲线绘制准确吸取砷标准工作溶液（1.0/mL）0.00、1.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL于发生瓶中，加10mL盐酸，加水稀释至40mL，从加入碘化钾起，以下按5.3环节操作，测其吸光度，求出回归方程各参数或绘制出标准曲线。当更换锌粒批号或者新配制Ag－DDTC吸取液、碘化钾溶液和氯化亚锡溶液，均应重新绘制标准曲线。还原反映与比色测定从5.1.1、5.1.2、5.1.3解决好的待测液中，准确吸取适量溶液（含砷量应≥1.0）于砷化氢发生器中，补加盐酸至总量为10mL，并用水稀释到40mL，使溶液中盐酸浓度为3mol/L，然后向试样溶液、试剂空白溶液、标准系列溶液各发生器中，加入2mL碘化钾溶液（150g/L），摇匀，加入1mL氯化亚锡溶液（3.17），摇匀，静置15min。准确吸取5.00mLAg－DDTC吸取液于吸取瓶中，连接好发生吸取装置（勿漏气，导管塞有膨松的乙酸铅棉花）。从发生器侧管迅速加入4g无砷锌粒，反映45min，当室温低于15℃时，反映延长至1h。反映中轻摇发生瓶2次，反映结束后，取下吸取瓶，用三氯甲烷定容至5mL，摇匀（避光时溶液颜色稳定2h）。以原吸取液（3.9）为参比，在520nm处，用1cm比色池测定。分析结果的计算与表述结果计算每公斤饲料中砷含量按式（1）计算：ωω＝A1×V1×1000m×V2×1000……………………（1）式中：ω———每公斤样品中含砷量，mg；V1———试样消解液总体积，mL；V2———分取试液体积，mL；A1———测试液中含砷量，μg；m———试样质量，g。若样品中砷含量很高，可用式（2）计算：ωω＝A2×V1×V3×1000m×V2×V4×1000……………………（2）式中：ω——每公斤样品中含砷量，mg；V1——试样消解液总体积，mL；V2——分取试液体积，mL；V3——分取液再定容体积，mL；V4——测定期分取V3的体积，mL；A2——测试液中含砷量，μg；m——试样质量，g。结果表达每个样品应做双样，以其算术平均值为分析结果，并表达至小数点后两位。当每公斤试样中含砷量≥1.0时，结果取三位有效数字。饲料中六六六、滴滴涕的测定GB/T13090－1999范围本标准规定了饲料中六六六的四种异构体和滴滴涕的四种衍生物的含量的气相色谱测定方法。本标准合用于配合饲料、植物性原料及鱼粉中六六六、滴滴涕异构体及衍生物（见表1）的检测。检测范围：每公斤饲料中六六六为5～500，滴滴涕为10～1000。通用名国际系统名（ISO1750）化学名称（IUPAC1）方法定量检测限(MLQ)(每公斤饲料中六六六甲体－六六六乙体－六六六丁体－六六六滴滴涕（DDT）对，对/－滴滴依邻，对/－滴滴涕对，对/－滴滴依邻，对/－滴滴涕HCH(BHC)α－HCH(α－BHC)β-HCH(β－BHC)δ-HCH(δ－BHC)DDTp,p/-DDEo,p/-DDEp,p/-DDE(TDE)p,p/-DDE(DDT)六氯环已烷(有下列四个异构体)1,3,5/2,4,6－六氯环已烷1,2,4,5/3,6－六氯环已烷1,2,3,4,5,6－六氯环已烷1,2,3/4,5,6－六氯环已烷二氯二苯基三氯乙烷(有下列四种衍生物)1,1－二氯－2,2－双(4－氯苯基)乙烯1,1,1－三氯－2－(2－氯苯基)－2－(－4－氯苯基)乙烷1,1-二氯－2，2－双(4－氯苯基)乙烷1,1,1-三氯－2,2－双(4－氯苯基)乙烷5555101010101）国际理论和应用化学联合会引用标准下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的也许性。GB/T8170－1987数值修约规则GB/T14699.1－1993饲料采样方法ISO1750:1981Pesticidesandotheragrochemicals-Commomnames原理样品中的六六六、滴滴涕采用品有少量丙酮的正已烷混合溶剂提取、过滤并定容，从中吸出一定量的提取液直接用硫酸酸化过的硅藻土微柱净化，正已烷洗脱液直接注入气相色谱仪，用电子捕获检测器检测，以外标法定性和定量。试剂除特殊规定外，本标准所用试剂均为分析纯，水为重蒸馏水或相应纯度的水。所有试剂在条件允许情况下，使用色谱纯的试剂。异辛烷：配置标准溶液用，在六六六、滴滴涕出峰处应无干扰峰，最佳选择优级纯或色谱纯的试剂。正已烷：沸程67.5℃～69.5℃。丙酮。提取液：正已烷－丙酮（22＋3）。发烟硫酸：含三氧化硫（SO3）20％～25％，优级纯。浓硫酸：优级纯。磷酸。无水硫酸钠：500℃烘4h，在高温烘箱中冷至200℃左右，放入干燥器中冷后密封备用。吸附剂：柱层析用。硅藻土孔径：177～600(30目～80目)Celite545孔径：20～45。500℃烘4h，在高温烘箱中放冷至200℃，置于干燥器中冷后密封备用。脱脂棉：用丙酮浸泡30min后，倾去丙酮，再用正已烷浸泡30min，弃去正已烷，晾干备用。六六六标准储备液：ρHCH＝0.100mg/mL，国家标准物质研究中心制，贮于安瓿中，低温及避光下保存，有效期壹年.甲体-六六六(α-HCH)GBW(E)060081乙体－六六六(β-HCH)GBW(E)060082丙体－六六六(γ-HCH)GBW(E)060083丁体－六六六(δ-HCH)GBW(E)060084滴滴涕标准储备液:ρDDT＝0.100mg/mL，国家标准物质研究中心制，贮于安瓿中，低温及避光下保存，有效期壹年。p,p/-DDTGBW(E)060102o,p/-DDTGBW(E)060103p,p/-DDEGBW(E)060104p,p/-DDDGBW(E)060105六六六中档浓度储备液：ρHCH＝1.00/mL。将四支六六六标准储备液（4.12），分别用异辛烷（4.2）在棕色容量瓶中稀释1000倍，密封贮放于暗处，4℃左右保存可稳定半年。滴滴涕中档浓度储备液：ρHCH＝10.0/mL。将四支滴滴涕标准储备液（4.13），分别用异辛烷（4.2）在棕色容量瓶中稀释10倍，密封贮放于暗处，4℃左右保存可稳定半年。系列混合标准工作液：分别用移液管吸六六六中档浓度标准储备液α-HCH10.0mL，β-HCH30.0mL，γ-HCH8.00mL，δ-HCH20.0mL；滴滴涕中档浓度标准储备液p,p/-DDE2.00mL，o,p/-DDT4.00mL，p,p/-DDD2.00mL和p,p/-DDT4.00mL，置于一只100mL棕色容量瓶中加异辛烷定容。此液则为6号混合标准工作液（见表2），并由此液逐步稀释后制得至少五种不同浓度的系列混合标准工作液，贮于暗处4℃左右保存不超过6个月。表2六六六、滴滴涕系列混合标准工作液的质量浓度标准工作液α-HCHβ-HCHγ-HCHδ-HCHp,p/-DDEo,p/-DDTp,p/-DDDp,p/-DDT1号1.003.000.802.002.004.002.004.002号5.0015.04.0010.010.020.010.020.03号10.030.08.0020.020.040.020.040.04号25.075.020.050.050.010050.01005号50.015040.01001002001002006号10030080.0200200400200400注：六六六、滴滴涕标准溶液有毒性，需经浓氢氧化钾（KOH）或六价铬酸洗液浸泡后，才干洗涤。仪器、设备气相色谱仪：配备有电子捕获检测器和数据解决仪。色谱柱：玻璃填充柱：2m×φ3mm，内装1.5％OV17+2.0%QF1/GCQ[孔径：149m～177m(80～100目)]或1.6％OV17＋6.4％OV210/ChromosorbW-HP〔孔径：149m～177m(80～100目)〕。毛细管色谱柱，弹性石英毛细管柱，CP－Sil8CB或SE54。柱长：25m或50m；内径：0.32mm或0.53mm；膜厚：0.25m。电动振荡器或超声波提取器。天平：感量1mg。三角烧瓶（具塞）：100mL。筒形漏斗：内径2cm，高5cm。容量瓶（棕色）：100、50、25、10mL。移液管：10、5、2、1mL。玻璃研钵：中型。层析柱：内径8mm～10mm，长15mm～20mm。上端带有一筒形漏斗贮液槽，容量为30mL左右。研磨机：带孔径为420m（40目）筛子。实验室常用仪器设备。载气：高纯氮99.99％。采样和试样的制备采样：按：GB/T14699.1的规定。试样制备：将送至实验室的平均样品，经四分法缩分至250g，用研磨机研碎，过孔径420m筛子，并装进密闭广口瓶中，在4℃左右避光保存备用。环节气相色谱仪调试色谱条件（见表3）表3柱型填充柱毛细管色谱柱检测器温度250℃300℃进样口温度230℃270℃柱箱温度210℃214℃分流比10：1载气流速（N2）60mL/min4mL/min～10mL/min补充气（N2）20mL/min～25mL/min仪器灵敏度检查进1号混合标准工作液（4.16）1.0μL，应能分别读出8个峰的峰面积或峰高，并记下相应的保存时间（RT）（见表4）。表4出峰顺序化合物保存时间（RT）min1α-HCH1.6352β-HCH2.0973γ-HCH2.3904δ-HCH2.785p,p/-DDE6.6486o,p/-DDT9.3757μ-DDD10.2928p,p/-DDT12.329仪器性能考察 注入p,p/－DDT单个标准标准溶液（4.15）约0.20μＬ，在р，р¹－DDE的出峰位置上不应有分解峰。仪器线性响应范围 进六种系列混合标准液（4.16）各1.00μＬ以及6号5.00μＬ，拟定其线性响应范围，如采用镍源ECD，线性范围102～104。空白实验 在不加饲料样品的情况下，按7.3、7.4、7.5各环节进行，各种化合物的空白测定值应低于方法定量检测（见表1）。如高于方法定量检测限应扣除本底值。提取 在100mL具塞三角烧瓶中，称试样5.000g左右，加入提取溶液（4.5）25mL，并滴加磷酸（4.8）4～5滴，摇匀后加盖，在电动振荡器振摇30min（60次/min～80次/min）或超声波提取15min，在筒形漏斗里塞少许脱脂棉及1cm厚无水硫酸钠（4.9），将提取液过滤入25mL容量瓶中，并洗涤残渣定容。此提取液摇匀备用。净化 在层析柱中塞入少许棉花，加约0.5cm厚的无水硫酸钠（4.9），再加酸化硅藻土（1.5g硅藻土或Cellite545置于玻璃研钵中，滴加0.6mL浓硫酸拌匀），立即装进柱里，敲实后在上面加约1cm厚无水硫酸钠（4.9）。将5mL提取液（7.3）放在装好的层析柱上，用正己烷（4.3）连续不断地以速度为（60～90）滴/min进行淋洗，并收集10mL淋洗液，即为待测样品净化液。气相色谱测定 将样品净化液（7.4）1μＬ～5μＬ，注进调试好的气相色谱仪中，根据保存时间定性为什么种化合物，最后记下其峰面积（As）。结果的计算和表述结果的计算 六六六、滴滴涕的含量以外标法测定。单点校正计算公式（该点必须在线性响应范围内） 六六六、滴滴涕的含量ωp，以每公斤样品中该组分的质量（μg）表达，按式（1）计算：As×mst×VAst×m×Viωp＝As×mst×VAst×m×Viωp＝…(1) 式中：ωp――每公斤样品中该组分的质量，μg； As――样品净化液中该组分的峰打印面积或峰高，μV·s或mm；Ast――与As峰面积相近的标准溶液中该组分的平均峰打印面积或峰高，μV·s或mm；mst――与As相的标准溶液中该组分的质量，pg;m――试样质量，g；V――试样净化液总体积，mL；Vi――试样净化液进样体积，μL。当空白实验该组分本底值高于MLQ时，As应扣除本底值。多点校正计算公式 进1～6号系列混合标准液后，求各个组分峰面积或峰高与其组分质量的线性回归方程按式（2）、式（3）、式（4）计算：（相关系数γ＞0.999）Ast＝a×mst＋b………（2）式中：Ast―――标准溶液中该组分峰打印面积或峰高，μL·s或mm；mst―――标准溶液中该组分的质量，pg；a―――该组分校正曲线的斜率，μL·s/pg或mm/pg；b―――该组分校正曲线的截距，μL·s或mmAsAs－bams=……（3）式中：ms――样品净化液中该组分的质量，pg；As――样品净化液中该组分的峰打印面积或峰高，μL·s或mm；a,b――同式（2）。故msms×Vm×Viωp＝(As－b)×Va×m×V＝…（4）式中：ωp、As、V、V、m――同公式（1）；a,b――同式（2）。结果的表述 计算结果应按GB/T8170的规定进行修约，以每公斤样品中含该组分的质量（μg）表述。 ――每公斤样品中该组分质量在低于10μg，只以一位有效位数表述； ――每公斤样品中该组分质量在10μg～100μg之间，以二位有效位数表述； ――每公斤样品中该组分质量高于100μg，以三位有效数表述； ――每公斤样品中该组分质量低于方法定量检测限，而高于仪器检测限（2倍噪声）时，以“T”代表痕量； ―――每公斤样品中该组分质量低于仪器的检测限，以“ND”代表未检出。 六六六总量的计算： 每公斤样品含四种六六六的总质量（μg）以ωHCH表达，按式（5）计算：ωHCH=ωα-HCH＋ωβ-HCH＋ωγ-HCH＋ωδ－HCH……（5）滴滴涕总量的计算：每公斤样品含四种滴滴涕的总质量（μg）以ωDDT表达，按式（6）计算： ωHCH＝ωp,p/-DDE＋ωo,p/-DDT＋ωp,p/-DDD＋ωp,p/-DDT………………（6）其它本法合用于检测大米、小麦、玉米等植物性原料中六六六、滴滴涕，并合用于测定鱼粉中六六六、滴滴涕。使用填充色谱柱测定六六六时，有机氯农药七氯会干扰β－HCH测定，因我国没有使用过七氯，测定结果影响不大。如检测进口饲料原料或产品，应采用分离性能好的毛细管色谱柱。有条件应配置GC/MS设备。检测时，如电子捕获检测器的基流不断增高，证明净化限度不好，可增长净化柱中酸性硅藻土的硫酸量（1.5g硅藻土＋1.0mL发烟硫酸＋1.0mL浓硫酸拌匀后装柱），硫酸用量不影响测定结果。本方法中使用了易燃和毒性有机溶剂，应在通风橱中进行操作。

检测方法标准(189项)1GB/T5917.1-2023饲料粉碎粒度测定两层筛筛分法2GB/T5918-2023饲料产品混合均匀度的测定3GB/T6432-1994饲料中粗蛋白测定方法4GB/T6433-2023饲料中粗脂肪的测定5GB/T6434-2023饲料中粗纤维的含量测定过滤法6GB/T6435-2023饲料中水分和其他挥发性物质含量的测定7GB/T6436-2023饲料中钙的测定8GB/T6437-2023饲料中总磷的测定分光光度法9GB/T6438-2023饲料中粗灰分的测定10GB/T6439-2023饲料中水溶性氯化物的测定11GB/T8381-2023饲料中黄曲霉素B1的测定半定量薄层色谱法12GB/T8381.2-2023饲料中志贺氏菌的检测方法13GB/T8381.3-2023饲料中林可霉素的测定14GB/T8381.4-2023配合饲料中T-2毒素的测定簿层色谱法15GB/T8381.5-2023饲料中北里霉素的测定16GB/T8381.6-2023配合饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定簿层色谱法17GB/T8381.7-2023饲料中喹乙醇的测定高效液相色谱法18GB/T8381.8-2023饲料中多氯联苯的测定气相色谱法19GB/T8381.9-2023饲料中氯霉素的测定气相色谱法20GB/T8381.10-2023饲料中磺胺喹噁啉的测定高效液相色谱法21GB/T8381.11-2023饲料中盐酸氨丙啉的测定高效液相色谱法22GB/T8622-2023饲料用大豆制品中尿素酶活性的测定23GB/T10649-2023微量元素预混合饲料混合均匀度的测定24GB/T13079-2023饲料中总砷的测定25GB/T13080-2023饲料中铅的测定原子吸取光谱法26GB/T13080.2-2023饲料添加剂蛋氨酸铁（铜、锰、锌）螯合率的测定凝胶过色谱法27GB/T13081-2023饲料中汞的测定28GB/T13082-1991饲料中镉的测定方法29GB/T13083-2023饲料中氟的测定离子选择性电极法30GB/T13084-2023饲料中氰化物的测定31GB/T13085-2023饲料中亚硝酸盐的测定比色法32GB/T13086-1991饲料中游离棉酚的测定方法33GB/T13087-1991饲料中异硫氰酸酯的测定方法34GB/T13088-2023饲料中铬的测定35GB/T13089-1991饲料中唑烷硫酮的测定方法36GB/T13090-2023饲料中六六六、滴滴涕的测定37GB/T13091-2023饲料中沙门氏菌的检测方法38GB/T13092-2023饲料中霉菌总数的测定39GB/T13093-2023饲料中细菌总数的测定40GB/T13882-2023饲料中碘的测定硫氰酸铁－亚硝酸催化动力学法41GB/T13883-2023饲料中硒的测定42GB/T13884-2023饲料中钴的测定原子吸取光谱法43GB/T13885-2023动物饲料中钙、铜、铁、镁、锰、钾、钠和锌含量的测定原子吸取光谱法44GB/T14698-2023饲料显微镜检查方法45GB/T14699.1-2023饲料采样46GB/T14700-2023饲料中维生素B1的测定47GB/T14701-2023饲料中维生素B2的测定48GB/T14702-2023饲料中维生素B6的测定高效液相色谱法49GB/T15399-1994饲料中含硫氨基酸测定方法离子互换色谱法50GB/T15400-1994饲料中色氨酸测定方法分光光度法51GB/T17480-2023饲料中黄曲霉毒素B1的测定酶联免疫吸附法52GB/T17481-2023预混料中氯化胆碱的测定53GB/T17776-1999饲料中硫的测定硝酸镁法54GB/T17777-2023饲料中钼的测定分光光度法55GB/T17778-2023预混合饲料中d-生物素的测定56GB/T17811-2023动物性蛋白质饲料胃蛋白酶消化率的测定过滤法57GB/T17812-2023饲料中维生素E的测定高效液相色谱法58GB/T17813-1999复合预混料中烟酸、叶酸的测定高效液相色谱法59GB/T17814-1999饲料中丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯和乙氧喹的测定60GB/T17815-1999饲料中丙酸、丙酸盐的测定61GB/T17816-1999饲料中总抗坏血酸的测定邻苯二胺荧光法62GB/T17817-2023饲料中维生素A的测定高效液相色谱法63GB/T17818-2023饲料中维生素D3的测定高效液相色谱法64GB/T17819-1999维生素预混料中维生素B12的测定高效液相色谱法65GB/T18246-2023饲料中氨基酸的测定66GB/T18397-2023复合预混合饲料中泛酸的测定高效液相色谱法67GB/T18633-2023饲料中钾的测定火焰光度法68GB/T18634-2023饲用植酸酶活性的测定分光光度法69GB/T18868-2023饲料中水分、粗蛋白质、粗纤维、粗脂肪、赖氨酸、蛋氨酸快速测定近红外光谱法70GB/T18869-2023饲料中大肠菌群的测定71GB/T18872-2023饲料中维生素K3的测定高效液相色谱法72GB/T18969-2023饲料中有机磷农药残留量的测定气相色谱法73GB/T19371.2-2023饲料中蛋氨酸羟基类似物的测定高效液相色谱法74GB/T19372-2023饲料中除虫菊酯类农药残留量测定气相色谱法75GB/T19373-2023饲料中氨基甲酸酯类农药残留量测定气相色谱法76GB/T19423-2023饲料中尼卡巴嗪的测定高效液相色谱法77GB/T19539-2023饲料中赭曲霉毒素A的测定78GB/T19540-2023饲料中玉米赤霉烯酮的测定79GB/T19542-2023饲料中磺胺类药物的测定高效液相色谱法80GB/T19684-2023饲料中金霉素的测定高效液相色谱法81GB/T20239-2023饲料中莱克多巴胺的测定高效液相色谱法82GB/T20230-2023饲料中牛羊源性成分的定性检测定性聚合酶链式反映（PCR）法83GB/T20231-2023饲料中嗜酸乳杆菌的微生物学检查84GB/T20234-2023饲料中淀粉含量的测定旋光法85GB/T20235-2023动物饲料试样的制备86GB/T20236-2023饲料中盐霉素的测定87GB/T20363-2023饲料中苯巴比妥的测定88GB/T20805-2023饲料中酸性洗涤木质素(ADL)的测定89GB/T20806-2023饲料中中性洗涤纤维(NDF)的测定90GB/T21033-2023饲料中免疫球蛋白IgG的测定高效液相色谱法91GB/T21036-2023饲料中盐酸多巴胺的测定高效液相色谱法92GB/T21037-2023饲料中三甲氧苄胺嘧啶的测定高效液相色谱法93GB/T21100-2023动物源性饲料中骆驼源性成分定性检测方法PCR方法94GB/T21101-2023动物源性饲料中猪源性成分定性检测方法PCR方法95GB/T21102-2023动物源性饲料中兔源性成分定性检测方法实时荧光PCR方法96GB/T21103-2023动物源性饲料中哺乳动物源性成分定性检测方法实时荧光PCR方法97GB/T21104-2023动物源性饲料中反刍动物源性成分（牛、羊、鹿）定性检测方法PCR方法98GB/T21105-2023动物源性饲料中狗源性成分定性检测方法PCR方法99GB/T21106-2023动物源性饲料中鹿源性成分定性检测方法PCR方法100GB/T21107-2023动物源性饲料中马、驴源性成分定性检测方法PCR方法101GB/T21108-2023饲料中氯霉素的测定高效液相色谱串联质谱法102GB/T21514-2023饲料中脂肪酸含量的测定103GB/T21542-2023饲料中恩拉霉素的测定微生物学法104GB/T21995-2023饲料中硝基咪唑类药物的测定液相色谱串联质谱法105GB/T22146-2023饲料中洛克沙胂的测定高效液相色谱法106GB/T22147-2023饲料中沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗的测定液相色谱质谱联用法107GB/T22259-2023饲料中土霉素的测定高效液相色108GB/T22260-2023饲料中甲基睾丸酮的测定高效液相色谱串联质谱法谱法109GB/T22261-2023饲料中维吉尼亚霉素的测定高效液相色谱法110GB/T22262-2023饲料中氯羟吡啶的测定高效液相色谱法111GB/T22545-2023宠物干粮食品辐照杀菌技术规范112GB/T23182-2023饲料中兽药及其他化学物检测实验规程113GB/T23187-2023饲料中叶黄素的测定高效液相色谱法114GB/T23385-2023饲料中氨苄青霉素的测定高效液相色谱法115GB/T23710-2023饲料中甜菜碱的测定离子色谱法116GB/T23737-2023饲料中游离刀豆氨酸的测定离子互换色谱法117GB/T23741-2023饲料中4种巴比妥类药物的测定118GB/T23742-2023饲料中盐酸不溶灰分的测定119GB/T23743-2023饲料中凝固酶阳性葡萄球菌的微生物学检查Baird-parker琼脂培养基计数法120GB/T23744-2023饲料中36种农药多残留测定气相色谱-质谱法121GB/T23873-2023饲料中马杜霉素铵的测定122GB/T23874-2023饲料添加剂木聚糖酶活力的测定分光光度法123GB/T23877-2023饲料酸化剂中柠檬酸、富马酸和乳酸的测定高效液相色谱法124GB/T23881-2023饲用纤维素酶活性的测定滤纸法125GB/T23882-2023饲料中L-抗坏血酸-2-磷酸酯的测定高效液相色谱法126GB/T23883-2023饲料中蓖麻碱的测定高效液相色谱法127GB/T23884-2023动物源性饲料中生物胺的测定高效液相色谱法128GB/T24318-2023杜马斯燃烧法测定饲料原料中总氮含量及粗蛋白质的计算129农业部783号公告-4-2023饲料中替米考星的测定高效液相色谱法130农业部783号公告-5-2023饲料中二硝托胺的测定高效液相色谱法131农业部783号公告-6-2023饲料中碘化酪蛋白的测定液相色谱质谱联用132农业部1063号公告-1-2023动物尿液中9种糖皮质激素的测定液相色谱-串联质谱法133农业部1063号公告-2-2023动物尿液中10种同化激素的测定液相色谱-串联质谱法134农业部1063号公告-3-2023动物尿液中11种β-受体激动剂的测定液相色谱-串联质谱法135农业部1063号公告-4-2023饲料中纳多洛尔的测定高效液相色谱法136农业部1063号公告-5-2023饲料中9种糖皮质激素的测定液相色谱-串联质谱法137农业部1063号公告-6-2023饲料中13种β-受体激动剂的测定液相色谱-串联质谱法138农业部1063号公告-7-2023饲料中8种β-受体激动剂的测定气相色谱-质谱法139农业部1068号公告-1-2023猪尿中士的宁的测定气相色谱－质谱法140农业部1068号公告-2-2023饲料中5种糖皮质激素的测定高效液相色谱法141农业部1068号公告-3-2023饲料中10种蛋白质同化激素的测定液相色谱－串联质谱法142农业部1068号公告-4-2023饲料中氯米芬的测定高效液相色谱法143农业部1068号公告-5-2023饲料中阿那曲唑的测定高效液相色谱法144农业部1068号公告-6-2023饲料中雷洛西芬的测定高效液相色谱法145农业部1068号公告-7-2023饲料中士的宁的测定气相色谱－质谱法146农业部1486号公告-1-2023饲料中苯乙醇胺A的测定高效液相色谱-串联质谱法147农业部1486号公告-2-2023饲料中可乐定和赛庚啶的测定液相色谱-串联质谱法148农业部1486号公告-3-2023饲料中安普霉素的测定高效液相色谱法149农业部1486号公告-4-2023饲料中硝基咪唑类药物的测定液相色谱-质谱法150农业部1486号公告-5-2023饲料中阿维菌素药物的测定液相色谱-质谱法151农业部1486号公告-6-2023饲料中雷琐酸内酯类药物的测定气相色谱-质谱法152农业部1486号公告-7-2023饲料中9种磺胺类药物的测定高效液相色谱法153农业部1486号公告-8-2023饲料中硝基呋喃类药物的测定高效液相色谱法154农业部1486号公告-9-2023饲料中氯烯雌醚的测定高效液相色谱法155农业部1486号公告-10-2023饲料中三唑仑的测定气相色谱-质谱法156NY438-2023饲料中盐酸克仑特罗的测定157NY/T724-2023饲料中拉沙洛西钠的测定高效液相色谱法158NY/T725-2023饲料中莫能菌素的测定高效液相色谱法159NY/T726-2023饲料中杆菌肽锌的测定高效液相色谱法160NY/T727-2023饲料中呋喃唑酮的测定高效液相色谱法161NY/T910-2023饲料中盐酸氯苯胍的测定高效液相色谱法162NY/T911-2023饲料添加剂ß-葡聚酶活力的测定分光光度法163NY/T912-2023饲料添加剂纤维素酶活力的测定分光光度法164NY/T914-2023饲料中氢化可的松的测定高效液相色谱法165NY/T918-2023饲料中雌二醇的测定高效液相色谱法166NY/T919-2023饲料中苯并（а）芘的测定高效液相色谱法167NY/T933-2023尿液中盐酸克仑特罗的测定胶体金免疫层析法168NY/T934-2023饲料中地西泮的测定高效液相色谱法169NY/T936-2023饲料中二甲硝咪唑的测定高效液相色谱法170NY/T937-2023饲料中西马特罗的测定高效液相色谱法171NY/T1030-2023饲料中沙丁胺醇的测定气相色谱/质谱法172NY/T1032-2023饲料中胆固醇的测定气相色谱法173NY/T1033-2023饲料中西马特罗的测定气相色谱/质谱法174NY/T1258-2023饲料中苏丹红染料的测定高效液相色谱法175NY/T1345-2023添加剂预混合饲料中肌醇的测定176NY/T1372-2023饲料中三聚氰胺的测定177NY/T1448-2023饲料辐照杀菌技术规范178NY/T1457-2023饲料中氟哌酸的测定高效液相色谱法179NY/T1458-2023饲料中盐酸异丙嗪、盐酸氯丙嗪、地西泮、盐酸硫利达嗪和奋乃静的同步测定高效液相色谱法和液相色谱质谱联用法180NY/T1459-2023饲料中酸性洗涤纤维的测定181NY/T1460-2023饲料中盐酸克仑特罗的测定酶联免疫吸附法182NY/T1463-2023饲料中安眠酮的测定高效液相色谱法183NY/T1448-2023饲料辐照杀菌技术规范184NY/T1619-2023饲料中甜菜碱的测定离子色谱法185NY/T1756-2023饲料中孔雀石绿的测定186NY/T1757-2023饲料中苯骈二氮杂䓬类药物的测定液相色谱-串联质谱法187NY/T1902-2023饲料中单核细胞增生李斯特氏菌的微生物学检查188SB/T10274-1996饲料显微镜检查图谱189LY/T1176-1995粉状松针膏饲料添加剂的实验方法