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共聚焦最新娱乐体验_七个聚焦(2024年11月深度解析)

内容来源：中小站长动力网所属栏目：话题更新日期：2024-11-29

共聚焦

共聚焦显微镜使用指南：防忘版嘿，大家好！今天我想跟大家分享一下如何使用共聚焦显微镜。作为一个实验室小白，我深知忘记步骤的痛苦，所以特地整理了一份防忘版的使用指南，希望能帮到大家。预约实验室时间 𐟓… 首先，记得提前预约公共实验室的时间。这样你就可以确保你有足够的时间进行实验，避免和其他人抢时间。开机步骤 𐟔犨🛥…奮ž验室后，按照以下步骤打开设备：从左到右依次按下按钮。扭动钥匙，打开激光。打开电脑上的软件，按照图示进行设置。观察样品 𐟔 接下来，观察DAPI染色的烟草。正面朝上盖上盖薄片，然后盖薄片朝下对着物镜。如果你需要观察免疫荧光制片，记得在镜头上加油。观察模式 𐟌ˆ 在软件中，你可以选择不同的观察模式： BF➕IL-shutter：明场观察。 FLUO➕DAPI：观察蓝色荧光（细胞核）。 FITC：观察绿色免疫荧光。 TXR：观察红色。保存文件 𐟒𞊥𝓤𝠥ˆ实验后，记得保存文件。点击停止live，然后点击start进行拍照。保存到电脑本地文档后，打开浏览器，登录云端账号（密码在桌面文档），将文件上传到云端。结果解读 𐟧슧𛿨‰𒨍祅‰通常表示载体表达的蛋白和荧光融合蛋白。绿色GFP和蓝色DAPI重合说明蛋白进入了细胞核。荧光二抗显示红色，比如一抗是h3k9me抗体，那么红色表示细胞核中组蛋白具有h3k3me，红色亮度大小可以表示甲基化程度。如果载体转入的是去甲基化酶，空载为绿蓝红都亮，表示具有甲基化。带有蛋白的载体为绿蓝亮，红不亮或变弱，表明该蛋白具有去甲基化酶活性。希望这份指南能帮到大家，祝大家实验顺利！如果有任何问题，欢迎留言讨论哦！

线粒体膜电位检测实验全攻略线粒体是细胞中非常重要的细胞器，它们负责生成ATP，促进能量转换，还参与细胞凋亡。线粒体在呼吸过程中会产生一种电化学势能，这种势能储存在线粒体内膜上，形成线粒体膜电位（MMP）。正常的MMP是细胞正常生理功能的基础。实验流程： 1. 细胞染色悬浮细胞细胞铺板：在6孔板中，每孔用1mL培养基重悬100万细胞。根据细胞类型选择合适的密度进行铺板。设置阳性对照：用CCCP处理细胞，然后在细胞培养箱中37℃孵育5分钟。 JC-1染色：加入适量JC-1，在细胞培养箱中37℃孵育15分钟。离心：孵育结束后，400g 4℃离心3~4分钟，弃上清。洗涤：用1㗐BS洗涤2次，400g 4℃离心3~4分钟。结果检测：用500的PBS重悬细胞，用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察，也可以用荧光分光光度计或流式细胞仪分析（绿色荧光：Ex/Em=510/527nm；红色荧光：Ex/Em=585/590nm）。贴壁细胞若用荧光分光光度计或流式细胞仪检测贴壁细胞，可先对贴壁细胞进行消化、收集，重悬后参考悬浮细胞的检测方法。若用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜检测：直接参考悬浮细胞实验步骤方法即可。注意事项： CCCP是一种线粒体电子传递链抑制剂，对人体有害，实验过程中一定要穿实验服并戴一次性手套操作，注意小心防护。 JC-1是光敏感性的，所有染色步骤的操作过程中避免强光接触；未用完的储存液，避光保存，并避免反复冻融。 JC-1染色完成后，应立即进行后续的结果分析，以减少各种可能的误差。通过这些步骤，你可以轻松检测线粒体膜电位，了解细胞能量转换的情况。

共聚焦成像荧光串色问题解决全攻略最近，橙子𐟍Š同学在进行GFP/mcherry双荧光成像时，遇到了一个令人头疼的问题——荧光串色。mcherry通道总是能接收到来自GFP通道的荧光，这不仅影响了实验结果，还让橙子同学感到非常困惑。于是，他向猫老师请教了这个问题，猫老师也详细询问了他的拍摄参数并进行了分析。 𐟍Š同学提供了GFP和mcherry荧光通道的发射图谱参数。GFP的发射图谱选择在500nm-545nm之间，这是没有问题的。然而，𐟍Š同学最初将mcherry的通道发射光谱设置在560-595nm左右。从mcherry自身的荧光图谱可以看出，其最大发射波长在600nm之后，而𐟍Š同学选择的接收范围并不在其最大发射范围内，这导致荧光相对较弱。为了达到所需的荧光强度，他不得不提高激光强度和增益，最终造成了串光干扰和背景增高。 𐟍Š同学随后调整了发射光谱的范围，但这次调整得太保守，将GFP和mcherry的接收范围都调整得非常窄，结果荧光信号几乎完全接收不到。即使不串光，荧光也没有了。如果再继续提高激光强度和增益，又会遇到同样的问题，得不偿失。在后续的调整中，𐟍Š同学尝试将光谱接收范围缩小，但仍然囊括了荧光蛋白的最大接收范围，并将两个光谱发射重叠的部分排除掉，以减少串光。因为接收范围大，不需要打到很高的激发强度和增益也能检测到荧光，这样可以最大限度减少串光干扰和背景。然而，即使进行了这些优化，𐟍Š同学发现激光强度和发射图谱都进行优化后，分通道扫描依然存在串光问题，mcherry通道还是有来自GFP通道的光。这时，猫老师请教了徕卡的工程师，工程师建议先进行下检测，即关闭mcherry通道，只打开GFP通道看mcherry通道是否能检测到来自GFP的荧光。结果发现有光，这可能和仪器本身的滤片有关。于是𐟍Š同学赶紧联系了片区徕卡工程师，期待后续反馈。通过这次经历，𐟍Š同学学到了如何在共聚焦成像中避免荧光串色问题的一些关键步骤和方法。希望他的经验能对其他遇到类似问题的研究生有所帮助。

「今天要来点生物学吗？」通过显微镜拍摄的细胞分裂过程。视频是一种结合了Differential Interference Contrast (DIC) Microscopy和旋转盘共聚焦显微镜的新型显微镜拍摄的。这种显微镜应该挺先进，因为范德堡大学Dylan Burnette实验室的负责人特意发推说，他们马上就有这种显微镜了。 DIC利用光的干涉效应来增强透明样品的对比度。它使用偏振光和特殊的棱镜（如Nomarski棱镜）来产生光程差，从而在图像中形成明暗对比。这种技术特别适合观察无色、透明的样品，如活细胞。旋转盘共聚焦显微镜通过使用旋转的针孔盘来实现快速的共聚焦成像。与传统的激光扫描共聚焦显微镜相比，旋转盘共聚焦显微镜能够更快地获取图像，并且减少了光漂白和光毒性。这使得它非常适合长时间的活细胞成像。将DIC和旋转盘共聚焦显微镜结合起来，可以同时获得高对比度的结构信息和高分辨率的荧光图像。物理芝士数学酱的微博视频

免疫荧光实验常见问题解答在进行免疫荧光实验时，可能会遇到一些常见问题。以下是一些实用的建议和解决方案：空白对照：对于石蜡切片的免疫组化，空白对照是必须的。目的是观察自发荧光。脱蜡后直接在荧光显微镜下观察。阴性对照：标本直接滴加二抗，应呈阴性反应。抗原对照：标本加同种动物的未免疫血清，以PBS冲洗后，再加入抗免疫球蛋白荧光抗体。未免疫动物的血清中无特异性抗体，应呈阴性反应。固定方法：细胞固定通常使用甲醇，而切片固定则使用多聚甲醛，染色方法相同。二抗标记：如果你的二抗是用FITC标记的，分装及观察时都要避光，以避免荧光分解。封片方法：封片最好使用甘油加0.5mmol/L pH9.0-9.5的碳酸氢盐缓冲液，这样可以使玻片更透明。免疫酶染色：如果使用过氧化物酶做标记，必须用3%H2O2去除内源性过氧化物酶。苏木素复染：如果需要进行苏木素复染，可以用盐酸溶液去除苏木素。激光共聚焦显微镜的使用：激光共聚焦显微镜的分辨率比普通荧光显微镜高得多。如果遇到模糊现象，首先要排除荧光显微镜的问题，如紫外灯泡寿命到期等。如果荧光显微镜没有问题，则以共聚焦显微镜的结果为主。激光共聚焦显微镜的操作：熟悉激光共聚焦的使用方法，开机和关机顺序要注意，尤其是激光器的使用，务必要预热10到15分钟方可打开激光。在smart set up中选择best signal，对应相应的激光波长选择相应的颜色（488-FITC，568-RHOD，647-White），后期也可在软件中进行修改。拍摄过程中要注意选择的像素和拍摄速度，一般选择1024*1024，speed为5-7。 Pinhole值不宜过大，在操作过程中可点击1AU-Max，获得荧光强度适宜的图层。为拍摄出完美的荧光图，可通过调整Gain值改变荧光强度，再通过调整Digital Offset和Digital Gain来降低背景噪音以及调整荧光强度。通过这些建议和解决方案，你可以更好地进行免疫荧光实验，获得更准确的结果。

11月的第一天拍了5h40min的激光共聚焦[微笑]我要整理到什么时候好累回去吃饭睡觉[淡淡的]

要睡在共聚焦室了𐟥𑀀

怎么会有人做了一周细胞拍三个小时共聚焦刚要保存电脑就黑屏重开的、、谁来殉我[彩虹屁]

百奥思科实验外包，高效透明北京百奥思科欢迎全国各地的合作伙伴加入，共同开拓业务。我们提供多种实验服务，包括动物实验、细胞实验、课题设计、石蜡包埋切片、HE染色、番红固绿染色、Masson染色、PAS染色等特殊染色服务，以及免疫组化、荧光、透射/扫描电镜、共聚焦、TUNEL检测、扫描、病理分析等病理实验。我们还提供PCR、Western Blot、ELISA检测，流式凋亡、流式周期检测，以及血管支架硬切等服务。我们的优势在于：周期短：快速响应，高效完成实验。价格优惠：提供有竞争力的价格。质量保证：确保实验结果的准确性。售后无忧：提供全面的售后服务。公司总部位于北京，实验室占地超过6000平方米，拥有SPF级实验室和先进的仪器设备。我们的技术团队和销售团队都具备丰富的经验和专业知识，欢迎随时参观，客户可以亲自参与实验。

电镜明星齐聚！谁最亮眼？ 𐟎“ 电镜界的四大明星：透射电镜/TEM、扫描电镜/SEM、原子力显微镜/AFM、激光扫描共聚焦显微镜/CLSM～～～ 𐟔 扫描电镜/SEM 作用：主要用于观察表面形貌、断口形貌以及微区化学成分分析。项目：表观形貌、EDS能谱点扫、EDS能谱线扫、EDS能谱面扫/Mapping（镀金后可拍摄弱磁/强磁样品）。推荐仪器：捷克泰思肯/TESCAN MIRA3 𐟔젩€射电子显微镜/TEM 作用：通过聚焦电子束投射到非常薄的样品上，形成透射电子束或衍射电子束的图像，分析样品内部的微观组织结构。项目：表面形貌、EDS能谱点扫、EDS能谱线扫、EDS能谱面扫/Mapping、HAADF(STEM)、衍射（非磁/弱磁/强磁样品均可拍摄）。推荐仪器：日本电子/JEOL JEM-1200、日本日立/HITACHI HT7800(120KV) 𐟌 原子力显微镜/AFM 作用：研究固体材料（包括绝缘体）的表面形貌结构信息和表面粗糙度。项目：表面形貌/粗糙度、厚度、相图、力曲线、杨氏模量、KPFM、PFM、C-AFM、EFM、LFM、MFM、Force Mapping、原位、液下、原子力显微镜-红外联用。推荐仪器：德国布鲁克/Bruker Maltimode8、德国布鲁克/Bruker Dimension ICON 𐟌🠦🀥…‰扫描共聚焦显微镜/CLSM 作用：应用于细胞或组织的形态结构观察、生物活性物质追踪和基因表达调控等研究。项目：细胞live/dead、探针在细胞内成像、免疫荧光、细胞器亚定位、组织成像、各类成分的多标记3D成像。推荐仪器：日本VL200DX-SVF17SP

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