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sds溶液前沿信息_sds十二烷基硫酸钠(2024年11月实时热点)

内容来源：中小站长动力网所属栏目：教程更新日期：2024-11-28

sds溶液

急性臭氧暴露对大鼠肺部细胞遗传毒性的影响是什么？ ? 前言 ? 臭氧(O3)是氮氧化物和挥发性有机物的二次污染物。近年来，光化学反应造成的大气O3污染逐渐变得较为严重，其主要来源是光化学烟雾，其次还可来源于消毒过程中紫外灯的使用等。 ? 已有研究表明，臭氧对植物、体外培养的微生物和细胞具有遗传毒性，关于体外培养细胞的研究多集中于对淋巴细胞、 A549细胞系、骨髓细胞等，对体内肺部细胞的遗传毒性研究相对较少，且仅局限于某一个水平探讨引起的遗传毒性。 ?? 将肺组织单细胞悬液涂于干净的载玻片上，自然晾干后，插入含甲醇固定液的槽中固定10 min，取出后放入Giemsa染色液中染色15 min，超纯水冲洗，晾干，油镜下观察计数。 ? 遵循最常用的方法，即 Z字形方法来筛选载玻片。在每张载玻片上计数 1 000个具有完整细胞核和细胞边界的细胞。从1 000个完整的细胞中计数MN的数量。 ? ?DNA-蛋白质交联实验 ? 取0．5 ml肺组织制备好的单细胞悬液，加入 0．5 ml SDS溶液，轻轻摇匀，65℃水浴加热10 min。将100 Tris-HCl-KCl溶液加入到上述溶液中。充分混合后，将液体倒入1 ml聚丙烯移液器吸头中，重复上述步骤7次，使DNA长度一致。 ? 冰上预冷5 min，4℃10 000 r/min离心5 min，将上清液转移到另一个离心管中保存。向沉淀中加入1 ml洗涤缓冲液，65℃水浴加热10 min。冰上预冷5 min。4℃，10 000 r/min离心5 min，收集上清到另一离心管中。 ? 向上述沉淀中加入0．5 ml洗涤缓冲液和0．5 ml 蛋白酶K溶液，充分混匀。60℃水浴中加热3 h，冰上骤冷5 min。4℃，12 000 r/min离心10 min，收集上清。 ? 用洗涤缓冲液制备各浓度的小牛胸腺DNA 溶液1 ml，使其终浓度为0、50、150、250、375、500、 750、1000、1500、2500 ng/ml，分别加入1 ml新鲜制备的Hoechst33258溶液(400 ng/ml)，混合均匀后，测量各组溶液的荧光强度，绘制DNA浓度标准曲线。 ? 取上述第三、四步骤中离心管的上清液并加入 1 ml新鲜制备的Hoechst 33258溶液。混合均匀后，在相同条件下测量荧光值。DNA和蛋白质交联率计算公式:DNA-蛋白质交联率=交联DNA含量/ (交联DNA含量+游离DNA含量)。 ? 实验结果数据采用均数ⱦ ‡准差(xⱳ)表达，采用SPSS 13．0统计软件进行分析，计数数据用卡方检验，计量数据用方差分析(ANVOA)进行比较。 ? 大鼠肺组织内8-OHdG含量的影响 ? 由于臭氧具有强氧化性，8-OHdG是DNA氧化损伤的产物，通常检测8-OHdG的含量可以反映出 DNA氧化损伤程度。随着臭氧浓度的升高，肺组织内8-OHdG的含量逐渐升高，0．12 ppm、0．5 ppm、1．0 ppm、2．0 ppm及4．0 ppm臭氧暴露组与对照组相比均有显著性差异，且在臭氧浓度为4．0 ppm时达到最大值(P＜0．05)。 ? 荧光显微镜下观察，对照组未见拖尾的细胞，只有完整的头部，表明细胞未发生DNA断裂;臭氧暴露组均可观察到拖尾的细胞，断裂的DNA游动移出细胞核外，形成尾部，形似彗星。 ? 采用软件分析图片显示，随着臭氧浓度的增大，0．12 ppm、0．5 ppm、1．0 ppm、2．0 ppm及4．0 ppm暴露组的拖尾数量及拖尾长度均显著升高(P＜0．05)。 ? 大鼠肺部细胞内DNA-蛋白质交联率的变化 ? DNA-蛋白质交联（DNA-protein crosslink，DPC）是指DNA链通过共价键的作用与蛋白质稳定的结合在一起，是一种较为严重的DNA损伤形式。 ? 与对照组相比，0．12 ppm、0．5 ppm、1．0 ppm、2．0 ppm及4．0 ppm臭氧暴露组大鼠肺部细胞内DNA-蛋白质交联率均显著性增加(P＜0．05)，且在2．0 ppm时达到最大值。 ? 急性臭氧暴露对肺部细胞染色体水平的影响 0．12 ppm、0．5 ppm、1．0 ppm、2．0 ppm及4．0 ppm 臭氧暴露组大鼠肺部细胞微核率分别为1．4‰，1． 6‰，2．0‰，2．4‰，3．0‰和3．2‰，微核率的发生与对照组相比均无统计学差异(P＞0．05)，但均随着臭氧浓度的升高，微核的发生率增加。 ? 结论 ? 综上所述，急性臭氧暴露对大鼠遗传毒性的影响，在DNA断裂方面，臭氧浓度越大，断裂损伤越大，而DNA-蛋白质交联方面，随着臭氧浓度的变化，出现先升高后下降的趋势。所以，臭氧致肺细胞遗传毒性方面，不同的水平进行分开检测与描述。

分子生物学小技巧：质粒提取全解析 𐟧슨𔨧𒒦取是分子生物学实验中的基本操作，但你真的了解其中的原理吗？很多人只知道使用试剂盒中的P1、P2、P3溶液，却对具体成分和作用一知半解。今天，我们就来深入探讨质粒提取的背后原理，让你真正掌握这项技术！质粒提取的基本原理 𐟌 质粒是独立于染色体外能够自我复制的环状DNA分子。质粒提取采用的是强碱裂解法。基本原理是：细菌悬浮液暴露于高PH的强阴离子洗涤剂中，细胞壁被裂解，染色体DNA和蛋白质发生变性，相互缠绕形成大型复合物。然后被十二烷基硫酸盐包裹，当用钾离子取代钠离子时，复合物会从溶液中沉淀下来，离心去除后，质粒DNA就存在于上清液中。由于DNA带负电，而质粒提取柱相当于一个阴离子柱，能够在高盐的条件下吸附DNA，然后通过去离子水洗脱，就得到纯化的质粒DNA了。 P1、P2、P3到底是什么？ 𐟧ꊐ1: 1M Tris-Hcl(PH8.0)25 mL + 0.5 MEDTA(PH8.0) 10mL 加超纯水定容至500mL，温热灭菌，常温保存。用时现加RNase。 P2: NaOH 4g + SDS 5g。加超纯水定容至500mL, 湿热灭菌, 常温保存。 P3: 乙酸钾147.21g + 冰醋酸57.5mL，加超纯水定容至500mL, 湿热灭菌, 常温保存。实验步骤详解 𐟏튥ꌥ‰试剂准备：从培养箱中取出前一天摇的菌液，从中取2mL离心，去上清，备用。P1在使用前加入RNA酶。菌体裂解：根据试剂说明，向含有菌体沉淀的EP管中加150 P1，震荡管底，使菌体全部溶解于溶液1中。然后加入150 P2，温和地上下翻转EP管8-10次。加入500 P3，立即剧烈翻转EP管8-10次，此时EP管中出现白色絮状沉淀。过柱纯化：将EP管12000转离心1分钟，用枪头小心地吸出上清液至收集柱中。12000转离心1分钟，弃去滤液，向收集管中加入500 PW漂洗液，12000转离心1分钟，弃去滤液，重复加入500 PW漂洗液，12000转离心1分钟，弃去滤液,12000转离心2分钟。把收集柱装入新的EP管中，室温晾干5分钟。在收集柱的膜中加入50提前预热的EB buffer或去离子水。室温静置1分钟。12000转离心2分钟。得到质粒DNA溶液。常见问题解答 𐟛 ️ 质粒提取的得率低或无质粒：可能是菌体老化或质粒拷贝数低。可以重新涂布筛选，挑选新的菌落进行液体培养。碱裂解不充分：收集的菌体含量较高时，可以酌情提高溶液P1、P2、P3的含量。乙醇残留：漂洗液没有去除干净。可以两遍醇洗以保证盐离子完全清除。洗脱处理不当：洗脱液加入较多或者洗脱时间过短。可以提前将洗脱液加热，从而加速DNA从柱体的脱离。质粒的纯化不足：可能混有RNA或基因组DNA。可以避免加入溶液P2、P3时剧烈震荡，减少菌体用量。总结 𐟓 看完这篇，你是不是对质粒提取的原理有了更深入的了解？下一期，我们将继续探讨大提质粒的技术。记得关注哦！

𐟧샃K-8实验常见问题大揭秘！ 𐟒Š 加药实验时，药物会影响测定吗？如何应对？有时药物与CCK-8发生反应，增加吸光度。确认药物有吸收后，可在加CCK-8前更换培养基去药物影响。 𐟓Š 测定值不稳定，原因何在？可能是培养板外圈孔干燥、CCK-8沾壁或细胞数量不当。确保操作准确，细胞数量适中。 𐟤” 如何设置空白对照？在无细胞培养基中加CCK-8，培养后测450nm吸光度。加药实验时，还应考虑药物吸收。 𐟔„ CCK-8加入时，需要更换培养基吗？通常不必，但若培养基含还原性物质，则需更换。 𐟚력“ꤺ›物质干扰CCK-8测定？还原性物质如维生素C的Glucose可能影响测定。注意酚红或血清通常不影响。 ⏰ 显色后如何终止反应？可将培养板放4℃或加HCL、SDS溶液。反应后24小时内测定。

动物组织中DNA提取与鉴定的实验指南 𐟧슣## 一、实验原理 𐟧ꊧ滥🃦Š€术：利用物体高速旋转时产生的强大离心力，使细胞、病毒等大分子物质沉降或漂浮，从而实现某些颗粒的分离。颗粒的沉降速度取决于离心机的转速及其自身与中心轴的距离，不同大小、形状、密度的颗粒以不同的速度沉降。动物组织中的RNA与DNA大部分与蛋白质形成核蛋白，在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度有显著差异。二、实验器材和试剂 𐟛 ️ 新鲜动物肝脏组织研钵或匀浆器电子天平离心机沸水浴 95%乙醇二苯胺试剂（取19份苯胺于1mL无水乙醇中加入275mL浓硫酸，置棕色瓶中，临用前新鲜配制）三、实验步骤 𐟓 取新鲜动物肝脏，加入6mL 1mol/L的NaCl溶液，在研钵中进行研磨或在匀浆器中匀浆5分钟。用滴管从小烧杯中吸取6mL肝组织匀浆，放入带刻度的离心管中，离心（4000rpm，10分钟）。取上清液移入离心管中，加入等体积的1.5% SDS，混合均匀，振荡5分钟（4000rpm，5分钟）。取3mL上清液移入离心管中，加入2倍体积的95%乙醇，混合均匀，振荡10分钟，使乙醇充分沉淀DNA，离心（4000rpm，5分钟），弃上清液。向沉淀中加入2mL 1mol/L NaCl溶液，使沉淀充分溶解，然后转移至试管中，加入2mL二苯胺试剂，混合均匀，加热观察颜色变化。四、结果 𐟑€ 试管由白色变为蓝色。原因：第一次离心可将蛋白质分离出来，加入SDS，可使核蛋白变性沉淀，将核酸物质萃取出来，储存于上清液中，再加入乙醇可使DNA沉淀。DNA可溶于1mol/L NaCl溶液中，加入二苯胺试剂后，水浴加热可变为蓝色，从而鉴定DNA。五、讨论 𐟤” 在鉴定DNA时，要将试剂SDS放入试管中，不能向离心管中加。将离心管放入离心机后，要在其对称位置放入质量相同的离心水，以减少误差。在离心时，一定要大力摆动，否则会导致沉淀过少，干扰实验结果。在制备肝组织匀浆时应研磨充分，否则易导致吸量不足，干扰实验。 SDS预处理要在6℃水浴中温热，原因：①促进SDS与样品充分混合，使SDS与蛋白质充分作用；②可以增加SDS的溶解度，从而提高效率。二苯胺试剂要新鲜配置，原因：①易被空气氧化，会影响其作为DNA鉴定试剂的准确性和稳定性；②保证反应的准确性，新鲜配制的二苯胺试剂与DNA反应的速率和效果最佳，从而提高实验的准确性和可重复性。安全性：二苯胺试剂具有一定毒性，新鲜配置可以减少试剂在储存和使用过程中对人体的危害。

史上最全WB实验操作及原理讲解③ Western Blot 实验通常使用SDS-PAGE进行电泳，根据目的蛋白的分子量选择合适的凝胶浓度。以10%的SDS-PAGE自制胶为例，以下是详细的操作步骤和注意事项：制备凝胶 𐟧ꊨㅩ…好灌胶的模具，按照配方配置分离胶（适量的丙烯酰胺溶液、10% SDS、分离胶缓冲液），加入适量的过硫酸铵和TEMED，轻轻搅拌（不要产生气泡）后缓慢加入到模具中。再在页面上小心注入一层水，以阻止氧气进入凝胶溶液中，静置40分钟。待凝胶聚合后，分离胶和水层出现一个清晰的界面，吸尽分离胶上的水。同样按比例配置浓缩胶（浓缩胶浓度较分离胶低），缓慢加入分离胶的上面，直至灌满。将梳子插入凝胶内，注意不得在梳子齿尖留有气泡，静置60分钟以上待凝胶聚合后拔出梳子。注意事项及原理 𐟓‹ 分离胶浓度：不同的分离胶浓度对不同的目的蛋白分子量的分辨率不一样，所以Western Blot中分离胶浓度的选择取决于目的蛋白分子量。过硫酸铵和TEMED的量：聚丙烯酰胺(PAGE)是由丙烯酰胺聚合形成的高分子，这个聚合反应是自由基聚合，需要有引发剂产生自由基将反应引发。过硫酸铵（AP）就是引发剂，而TEMED（四甲基乙二胺）可以催化过硫酸铵产生自由基，催化聚丙烯酰胺单体聚合成网状结构。但是两者的量一定适宜，否则会有烧胶或带变形的可能。加入一层水：在注入分离胶后上面需要加入一层水，这是因为空气中的氧分子会氧化AP使其活性减弱。加入这层水后可以让反应快速进行，同时也保证了分离胶上层面的平整。加样 𐟒犥𐏥🃦‹”出梳子，将制好的凝胶及玻璃板放入电泳槽内并组装好。将电泳缓冲液加入内外槽，使凝胶的上下两端均能浸泡在电泳缓冲液中。将待测蛋白样品与上样缓冲液按比例混合，沸水中加热3-5分钟使蛋白充分变性。将样品加入到凝胶孔中，同时必须在同一片胶的孔中加入蛋白marker作为参照。加样时间要尽量短，以免样品扩散。电泳 𐟔‹ 当样品上样并接通两极间电流后（电泳槽的上方为负极，下方为正极），在凝胶中形成移动界面并带动凝胶中所含SDS负电荷的多肽复合物向正极推进。电泳时通常上层浓缩胶时采用低电压（80-100V）恒压电泳，而在溴酚蓝进入下层分离胶时采用高电压（120V）恒压电泳。溴酚蓝染料前沿下至凝胶末端时停止电泳。电泳完毕的胶完整地放在盛有电泳液的玻璃皿中，将目的蛋白所在区域切下来。持续更新，敬请关注~

SDS-PAGE电泳原理与IEF技术详解 𐟌📄S-PAGE电泳原理 SDS-PAGE（十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）是一种广泛用于分离大分子的技术，包括DNA、RNA和蛋白质。通过施加电场，带电离子在电泳过程中发生迁移。分子的迁移率取决于其净电荷和通过溶液的电阻。SDS（十二烷基硫酸钠）是一种阴离子去污剂，其在较广的pH范围内带有净负电荷。多肽链与SDS结合，其结合量与其相对分子质量成比例，破坏蛋白质的复杂结构。在SDS-PAGE中，凝胶被分为浓缩胶和分离胶两层。浓缩胶位于底部，较大，而分离胶位于顶部，较窄。电泳缓冲液由甘氨酸制成，pH值为8.3。浓缩胶的pH值为6.8，而分离胶的pH值为8.8。电流由带负电荷的分子携带，向同一个方向迁移。在pH 8.3时，约有10%的甘氨酸分子带负电荷，因此电流主要由堆积缓冲液中的Cl-离子携带。Cl-离子在蛋白质之前朝堆积凝胶底部堆积，使得由SDS包裹的蛋白质分子被夹在甘氨酸分子和Cl-离子之间，被浓缩成比最初加载的体积小得多的条带。随着电流作用迁移，蛋白质迁移到分离胶中。此时，pH为8.8的分离凝胶缓冲液中的甘氨酸成为带负电荷的分子，能够非常快速的迁移，几乎与Cl-离子保持一致，而蛋白质紧随其后。蛋白质经由Cl-和甘氨酸阴离子的移动轨迹进入分离凝胶而携带电流。蛋白质变成一种具有类似流体动力学性质的杆状带负电荷高分子，其迁移率仅取决于其分子质量。 𐟌🧭‰电聚焦IEF分析等电聚焦（IEF）是一种基于蛋白质等电点（pI）分离蛋白质的电泳技术。当pI=pH时，蛋白质净电荷为0，因此蛋白质不会在电场中迁移。在IEF中，蛋白质的分离是在含有两性电解质混合物的聚丙烯酰胺或琼脂糖凝胶中进行的，两性电解质在电场中迁移并在凝胶中形成pH梯度。蛋白分子被集中在一个具有pH梯度的介质中，通过介质的电流将产生带正电荷的氧化极和带负电荷的还原极。带电的蛋白质分子会向与其有相反电荷的一极运动，直到与周围pH值与其等电点相同时带电分子才停止在凝胶中运动，即蛋白质净电荷为0时。于是，具有相同等电点的蛋白质集中在pH固定的条带中。每种蛋白质都位于pH梯度中与其pI相对应的位置。

𐟧젓DS-PAGE电泳的三大要点 SDS-PAGE（十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）是生物化学中常用的蛋白质电泳技术。𐟔젥œ訿™个过程中，SDS和还原试剂将蛋白质分子解聚，根据亚基的大小不同，在恒定pH（碱性）缓冲系统中进行分离。𐟒ꊊ影响SDS-PAGE电泳结果的关键因素有三个： 1️⃣ SDS浓度：蛋白质与SDS的结合程度是成功的关键。SDS在水溶液中以单体和SDS多肽束的形式存在，而只有单体能与蛋白质结合。为了确保蛋白质与SDS的充分结合，需要控制SDS单体的平衡浓度，并确保样品缓冲液的离子强度较低，通常为10～100mmol/L。𐟧ꊊ2️⃣ 二硫键还原：只有当二硫键被彻底还原后，蛋白质才能被解聚，SDS才能与蛋白质分子充分结合。常用的还原剂有巯基乙醇和DTT，它们的效果和稳定性有所不同，选择时需根据实验需求来决定。𐟔犊3️⃣ 样品处理：在准备样品时，需要确保蛋白质与SDS的均匀混合，并避免在处理过程中引入杂质或污染。正确的样品处理步骤对于获得准确的电泳结果至关重要。𐟒‰ 掌握这些要点，能够确保SDS-PAGE电泳实验的顺利进行，并获得可靠的实验数据。𐟓Š

牛肉嫩化秘诀：NaCl处理效果惊人！ 𐟔 研究背景：想要探索如何让牛肉更加嫩滑？研究人员发现了关键因素——氯化钠（NaCl）的处理效果。不同浓度的NaCl对牛肉的影响如何？让我们一探究竟！ 𐟎 ”究目标和假设：研究团队致力于了解1%和3%的NaCl溶液如何影响牛肉的肌内胶原成熟度、热溶性、热稳定性和结构变化，以及相关酶活性。目标是利用NaCl处理来改善牛肉的嫩度。 𐟔젦–𙦳•：在屠宰后，研究团队对牛背最长肌样品进行了1%或3%的NaCl溶液处理。通过ELISA、DSC、荧光光谱和SDS-PAGE等技术，他们测量了胶原交联、酶活性、热性质、表面疏水性和蛋白质结构的变化。 𐟓Š 结果和发现：实验结果显示，NaCl处理，尤其是3%的NaCl，能够显著调节赖氨酸氧化酶、葡萄糖醛酶和半乳糖苷酶等酶的活性。这有助于增强肌内胶原的热溶性，降低其热稳定性，并促进胶原的降解和构象变化，最终改善牛肉的嫩度。 𐟒젨’Œ解释：研究团队解释道，NaCl处理通过控制胶原交联和蛋白多糖降解的酶活性，改变了肌内胶原的特性。这种变化增加了胶原的溶解度并降低了其热稳定性，从而提高了牛肉的嫩度。 𐟌Ÿ 对该领域的贡献：这项研究为利用NaCl调节肌内结缔组织和相关酶的性质，进而提高牛肉嫩度提供了宝贵的见解，尤其是对于来自老龄牛的较硬牛肉。 𐟏† 成就和意义：研究团队成功地证明了3%浓度的NaCl处理能够有效地提高屠宰后牛肉的嫩度，通过改变肌内胶原和相关酶的特性。 𐟔„ 局限性和未来工作：虽然这项研究探索了两种NaCl浓度，但未来的研究可以进一步探索更广范围的NaCl浓度或与其他嫩化处理的组合，以优化牛肉的嫩度。

碱变性法：提质粒奥秘碱变性法提取质粒DNA，是一种利用染色体DNA与质粒DNA在碱性条件下的变性差异来实现分离的技术。𐟔찟Œ🊊在pH值为12.6的强碱性环境中，染色体DNA的氢键会断裂，导致其双螺旋结构解开并变性。𐟌€𐟒堧„𖨀Œ，质粒DNA的大部分氢键也会断裂，但由于其超螺旋共价闭合环状结构，两条互补链并不会完全分离。𐟔„𐟒ኊ当加入pH为4.8的NaAc高盐缓冲液，将pH值调节至中性时，变性的质粒DNA会恢复其原始构型，并保存在溶液中。𐟒簟”„ 相反，染色体DNA无法复性，会形成缠连的网状结构，通过离心作用，与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来，从而被去除。𐟌€𐟒” 这一方法为分子生物学研究提供了有效的质粒DNA提取手段，是实验室中常用的技术之一。𐟏ž️𐟔쀀

𐟒夸€步法快速蛋白染色秘籍𐟒劰Ÿ窦ƒ𓨦快速染色你的蛋白样品吗？试试一步法快速蛋白染色液吧！这种神奇的染色液，又被称为“考马斯亮蓝”，能在SDS-PAGE电泳后迅速让你的蛋白条带显色。 𐟒橦–先，你需要将电泳后的PAGE胶放入容器中，加入50ml双蒸水或去离子水，加热至沸腾后停止，继续在脱色摇床上摇动5分钟，然后弃去水溶液。 𐟌ˆ接下来，配制25ml快速染色工作液。将溶液B按比例加入溶液A中，混匀后倒入容器，加热至沸腾后保持沸腾状态30-60秒。停止加热后，继续在脱色摇床上摇动5-10分钟，此时你的蛋白条带应该已经显见。 𐟒ᥰ贴士：染色前的清洗步骤非常关键，水的质量会直接影响染色效果。而且，脱色时可以使用自来水进行清洗哦！ 𐟌Ÿ若想要得到无背景的染色胶，可以重复脱色步骤或在水中过夜。每次加热后，继续在脱色摇床上摇动5分钟，还能增强染色效果呢！ 𐟎‰现在，你的蛋白样品已经快速染色完成，是不是很方便呢？快来试试吧！

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