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ep管最新娱乐体验_ep管的型号和规格(2024年11月深度解析)

内容来源：中小站长动力网所属栏目：话题更新日期：2024-11-29

ep管

rt-pcr RT-PCR 实验是分子生物学中常用的技术，以下是实验过程中的一些关键步骤和注意事项：实验准备 𐟧ꊥꌥ𜀥狥‰，务必佩戴口罩和手套，避免人员干扰。试剂准备 𐟧𜊒T 试剂盒从冰箱取出后，应充分解冻并混匀，放在冰上备用。使用数字贴纸编号，避免试剂漏加或错加。操作细节 𐟔슥–用不同试剂时，更换枪头，避免样本间交叉污染。逆转录反应 𐟔„ 逆转录时，PCR仪可以提前预热。反应体系 𐟧‚ 反应体系配好后，充分混匀并瞬离，去除管内气泡。 RNA酶污染 𐟚능ꌨ🇧苤𘭨恩℩˜𒒎A酶污染，使用无酶枪头和EP管，台面可使用固相RNA酶去除剂清洁。 PCR操作 𐟓ˆ PCR时，尽量避免在管壁上写字。管盖密封 𐟔’ 管盖一定要盖严，确保反应条件稳定。 RNA量控制 𐟓 10逆转录反应体系建议加入不超过500ng的RNA。如果目的基因表达量低，最多加入1 Total RNA，避免超出PCR线性范围。反应体积 𐟓 反应体积可根据需要等比例放大。试剂保存 ❄️ 试剂尽量不要反复冻融，以免影响实验结果。平行孔设置 𐟓Š 每个样品至少设置3个平行孔，所有成分加完后，离心去除气泡。共同物质处理 𐟧슥殺†所有共同物质加入同一管中，混匀后分散入其他管中，简化操作。通过以上步骤和注意事项，可以确保RT-PCR实验的准确性和可靠性。希望这些信息对你有所帮助！

WB实验内参跑齐的秘诀，不看后悔！哈喽，大家好！我是盛夏学姐，今天继续给大家分享一些关于WB实验的小技巧。很多人都在问，不测蛋白浓度怎么能让内参跑齐？其实，这里面有一些小窍门，下面我就来详细讲解一下。首先，图二展示了我分为两组的EP管，用于收集细胞沉淀。你能明显看到，两组的细胞沉淀量是差不多大的。这里是怎么做到的呢？其实很简单，我采用了巴氏管铺板法，确保每孔之间的细胞数一致。这样一来，收集到的细胞沉淀量自然也就差不多了。接下来，图三展示了我做的3组生物学重复的内参，齐且均匀一致。这里又是怎么做到的呢？其实关键在于上样时的操作。我每组都加入了等量的裂解液，比如50-100ul/管，最后提取的蛋白体积大约也是50-100ul/管。上样时，每组都上同样的体积，比如6-8ul/组。这样做的好处是，可以根据统一体积上样后，作为条带深浅增减上样量的基准。大家学会了吗？希望这些小技巧能帮助你们在WB实验中跑出好看的条带！如果有任何疑问，欢迎在评论区讨论和答疑哦𐟑‡𐟑‡ 祝大家实验顺利！

RIP和MeRIP实验全攻略：步骤详解 RIP和MeRIP是两种不同的实验方法，各有各的目的。RIP实验的目的是验证蛋白质和RNA的结合情况，而MeRIP则是为了研究特定基因上的修饰。两者的操作步骤也略有不同，但都需要在低温条件下进行，并添加RNase Inhibitor和蛋白酶抑制剂。 RIP实验步骤：准备工作：将细胞放在冰上，加入1ml RIP buffer（含有25 mM Tris, pH 7.4, 150 mM KCl, 0.5 mM DTT, 0.5% NP-40），并加入蛋白酶抑制剂和RNase Inhibitor。在冰上裂解20分钟。收集细胞：将细胞收集到1.5ml的EP管中，4度下15分钟，12000g离心，取上清液到新的EP管中。取适量总蛋白作为Input，用于后续的WB检测。抗体孵育：将剩余的上清液与目的蛋白抗体混合，4度下孵育过夜。清洗Beads：用10倍体积的NT2 buffer（含有50 mM Tris, pH 7.4, 150 mM NaCl, 1 mM MgCl2, 0.05% NP-40）清洗Protein A/G beads，4度下1000rpm离心1分钟，重复3次。将步骤2中得到的蛋白-抗体复合物加到预清洗好的beads中，并加入RNase Inhibitor。4度下摇床4小时。清洗Beads：用1ml NT2 buffer清洗beads，4度下1000rpm离心1分钟，重复3-5次。最后一次洗beads时，取出适量beads，加2xloading buffer煮沸，进行WB检测。提取RNA：加500ul Trizol震荡混匀，4度下摇床10分钟。加入100ul氯仿，震荡混匀，冰上5分钟。4度下15000g离心15分钟。分离RNA：取上层水相于新的RNase free的1.5EP管中，加入2ul糖原混匀，再加入等体积异丙醇，-20度过夜。4度下15000g离心10分钟，去上清，加入1ml 75%乙醇颠倒混匀。4度下7500g离心5分钟，去上清。室温晾干后，加入20ul DEPC水溶解，测溶度后进行后续qRT-PCR检测。 MeRIP实验步骤：提取总RNA：首先提取细胞中的总RNA。抗体拉RNA：用修饰抗体拉取特定RNA。清洗Beads：用NT2 buffer清洗beads，并进行后续操作。提取RNA：提取beads上的RNA，并进行测序或qRT-PCR验证。这两种实验方法都需要在低温条件下进行，并添加RNase Inhibitor和蛋白酶抑制剂，以确保实验结果的准确性。

超速离心机的那些事儿：配平、故障与维护在实验室里，超速离心机可是个宝贝，但使用起来也是一把双刃剑。记得有一次，农学院的一个老师讲起他之前的经历，说有个离心机没有配平，结果转子直接打穿了墙壁，100多万的仪器就这样报废了。听得我心都凉了一半。前几天，我用国产的低温离心机，想着2毫升的ep管应该没啥问题，结果12000rpm一转，管子直接碎在里面了。幸好实验室的人发现得早，不然可能还会出更大的事故。现在每次用离心机，配平都得校正两次，真是麻烦得要命。另外，我还想问问大家，贝克曼的离心管一般能重复用几次？我总觉得这东西挺贵的，扔了怪可惜的。但要是重复用，又怕会影响实验结果。总之，超速离心机这东西，真的是一做就是一天，心累啊！

ep管有分离焦虑症我也有

CCK-8实验指南：悬浮细胞篇 𐟧ꠥꌥ‡†备在进行实验前，确保你准备好以下物品：超净台、完全培养基、96孔板、ep管、移液枪及枪头、细胞计数仪、培养箱、显微镜和酶标仪等。 𐟔⠧쬤𘀦�𜚧𛆨ƒž计数与悬液制备首先，使用细胞计数仪计算细胞数量，并制备细胞悬液。将培养瓶中的细胞转移到ep管中，离心（900rpm，5min）后去除上清液。使用1ml培养基重悬细胞，取10微升进行计数。根据计数结果，制备所需浓度的细胞悬液。 𐟓Š 第二步：细胞铺板与接种在96孔板的最外围加入100微升PBS，以减少边缘挥发效应对实验数据的影响。将细胞悬液按照空白孔、对照孔、低浓度至高浓度的顺序加入到96孔板中，每个浓度设置6个复孔。空白孔中加入100ul培养基，对照孔中不加药物。 𐟕𐯸 第三步：孵育将铺好细胞的96孔板放入培养箱中，孵育24小时或48小时，具体时间根据细胞密度进行调整。 𐟒Š 第四步：加药设置浓度梯度，将药物加入到相应的孔中。例如，在序号为2345678的ep管内分别加入800ul培养基，在序号为9的ep管内加入药物，然后转移到8号管中，依次类推，直至得到所需浓度的药物。将左侧的空白孔和对照孔内分别加入100ul的空白培养基。 𐟕𐯸 第五步：再次孵育加药后，将96孔板放入培养箱中，继续孵育24小时或48小时。 𐟓Š 第六步：加入CCK-8并测量OD值在避光条件下，使用电枪设置好20ul参数后，每孔加入20ulCCK-8（浓度为10%）。加完后放入培养箱中等待4小时，然后使用酶标仪测量OD值（避光进行）。通过以上步骤，你就可以完成CCK-8实验，了解药物对悬浮细胞的影响啦！𐟎‰

𐟧ꦴ𛦀禰璏S检测操作指南 𐟔젱. 提前开启超净台紫外消毒30分钟，同时将完全培养基溶液放置至室温。 𐟒蠲. 关闭紫外后，开启吹风2-3分钟，用酒精擦拭桌面进行清洁。 𐟧꠳. 用1mL 0.25%胰酶消化细胞，轻柔摇晃使胰酶覆盖全部细胞，约10秒后吸弃胰酶。镜下观察细胞变圆开始脱落，加入1mL完全培养基终止消化。 𐟔⠴. 将细胞悬液转移至1.5mL EP管中，吹打混匀后取10加至细胞计数板上计数。将(5X105个/孔)细胞接种在6孔板中。 𐟌᯸ 5. 将培养板置于37℃，5% CO2培养箱中预培养24小时。 𐟔젶. 弃去原培养基，加入1mL新鲜无血清培养基，再加入1 DHE探针（根据试剂盒说明添加），轻轻混匀后在培养箱内避光孵育30分钟。同时准备一管不加探针标记的作为阴性对照。 𐟚🠷. 吸弃探针，加入1ml PBS清洗两次，用胰酶消化制备成单细胞悬液，完全培养基终止消化后转移至1.5mL EP管中。离心后弃上清，加入1mL PBS重悬，再次离心后弃PBS，加入500 PBS重悬细胞。 𐟓Š 8. 将细胞悬液转移至流式上样管中，在激发波长535nm，发射波长610nm附近测定细胞内活性氧水平。 𐟔堹. 清理超净台台面及细胞房，开启超净台紫外消毒灭菌。 𐟒ᥰ贴士：推荐使用碧云天试剂盒进行检测哦！

秀丽线虫生化含量测定全攻略 𐟍‰秀丽线虫的SOD含量测定 𐟍‰秀丽线虫的CAT含量测定 𐟍‰秀丽线虫的甘油三酯含量测定 𐟍‰秀丽线虫的胆固醇含量测定 𐟍‰秀丽线虫的甘油三酯含量测定大部分生化含量测定方法的前处理步骤基本相同。以下是详细的操作步骤：准备工作样本的收集同步化大量秀丽线虫（一个组至少培养2个9cm培养皿）。准备1.5ml的EP管，并称重记录。培养或处理至测定时期后，将秀丽线虫从培养皿中转移至1.5ml的EP管中。使用从9缓冲液，将线虫清洗干净，尽量去除菌落。多次离心或静置60分钟，去上清，尽可能吸出虫体上层全部液体（残余液体越少，结果越准确）。将样品管称重，减去EP管重量，记录线虫重量（测含量一般100mg左右样本为佳）。新鲜样本直接处理和测定效果最好，如无法及时处理，可保存于-80℃冰箱。样本处理线虫样本为组织样本，大部分试剂盒使用PBS（PH=7.2-7.4）或生理盐水作为匀浆溶剂（溶剂以试剂盒说明书为准），其处理方式一般如下：匀浆的比例一般为组织：匀浆溶剂=1:9，相当于100mg组织加0.9ml的匀浆溶剂来进行匀浆。冰浴条件下（4℃），在组织破碎仪或研磨仪中进行破碎。破碎结束后，4℃3000rpm离心10分钟（转速以说明书为准）。上清即为待测液，可将上清转移至新的EP管，待测。注意事项试剂盒灵敏度高的话，50mg样品也足够（一定要反复问清楚商家）。匀浆比例可以调整，如果组织量少或样品中待测物质含量少，可减少匀浆溶剂量，最少为组织：匀浆溶剂=1:5。可随便收取一些样品，做一次预实验，以确定是否需要调整匀浆比例。如果出现样品不显色，首先观察标准品是否反应，如果标准品无问题，可尝试梯度加大上样量以及增加孵育时间。（难用试剂盒的改进放大，实在不行换试剂盒）。感谢一直支持我的小伙伴们，希望这些信息对你们有所帮助！

Caco-2细胞冻存全攻略，轻松搞定！细胞冻存是实验室中一项重要的技术，今天我们来分享一下Caco-2细胞的冻存步骤。准备好以下试剂和材料：胰酶、冻存液、15毫升EP管、完全培养基和PBS（含双抗）。 1️⃣ 首先，将所有试剂放在操作台上，并用紫外照射至少30分钟进行消毒。 2️⃣ 打开安全柜通风橱，用酒精擦拭台面。 3️⃣ 从培养箱中取出细胞，在显微镜下观察细胞的形态和密度。通常在细胞密度达到80-90%时进行传代和冻存。 4️⃣ 将培养皿中的培养基去除，用PBS清洗1-2遍（10cm皿用3ml，T25瓶用2ml，6cm皿用1ml）。 5️⃣ 吸走PBS后，向10cm皿中加入3ml胰酶，放入培养箱中，37度消化5分钟。 6️⃣ 当细胞变悬浮变圆后，加入3ml完全培养基终止消化，将未脱落的细胞轻轻吹下，转移至15毫升离心管中。 7️⃣ 将细胞放置离心机中，以1200rpm离心5分钟。 8️⃣ 弃掉上清液，加入适量细胞冻存液，吹打均匀，分装至细胞冻存管中。在离心途中提前将冻存管进行标记，注明细胞名称、冻存时间和冻存者姓名。 9️⃣ 将分装好的细胞盖紧，并用封口膜进行封口。 𐟔Ÿ 直接将细胞放置-80冰箱储存。通过以上步骤，你就能成功冻存Caco-2细胞啦！记得在操作过程中保持无菌操作，确保细胞的健康和安全。

HIF指标搞定！abmart助力折腾了好久，终于把缺氧指标之一的HIF1ž定了，真是感谢abmart的救命之恩！𐟙 首先，我查了一下资料，发现缺氧指标在常氧下几分钟就降解了，所以我在乏氧箱里提蛋白。因为乏氧箱不太好操作，我就用预冷的PBS洗了一遍，然后加入含有磷酸酶抑制剂和蛋白酶抑制剂的RIPA裂解液，刮到EP管里，接下来就是正常的提蛋白步骤了。缺氧的情况下，好像不能用GAPDH做内参，所以我用了ACTIN内参，之前也试过TUBULIN内参，效果也不错。 HIF指标是用7.5%的胶跑的，电泳150V 60分钟，转膜是免冰浴400mA 45分钟，用的是成品无蛋白封闭液，封闭半小时，一抗4℃过夜，二抗室温1小时。还是挺顺利的，跑了两次就搞定了。感觉提蛋白这一步很重要，避免降解，抗体也很关键，有些抗体杂带太多，真是让人头疼。 Bcl-2我用的是12%的胶，电泳和转膜参数同上。一开始用0.2的膜，后来发现0.45的也很OK。有时候WB真是个玄学[捂脸R]。样品跑了两次后，感觉还是需要涡旋一下再离心，取上清来做WB比较好。中间有几次突然内参就不齐了，真是当头一棒[失望R]。我要跑的指标比较多（abmart的试用装真是救大命了[赞R]），有些蛋白分子量太接近，整膜要跑两张。为了避免混乱，我用蓝色圆珠笔在左上角写编号，还可以区分正反面。经过马克笔、铅笔、圆珠笔的实验，我发现圆珠笔最好用，强推！预祝各位道友SCI顺利accept！！[得意R][得意R][得意R]

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