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基质胶最新娱乐体验_基质胶放在四度了怎么办(2024年12月深度解析)

内容来源：中小站长动力网所属栏目：话题更新日期：2024-11-29

基质胶

12周龄裸鼠造模失败？试试这些方法吧！最近在做A549皮下瘤的实验，真是让人头疼。之前细胞培养一直不稳定，好不容易养起来了，结果发现老鼠已经12周龄了。造模时打了不少细胞，每只老鼠都打了一个满的T25瓶。等了几天，结果还是失败了，细胞根本没长起来。𐟘튊我觉得失败的原因可能是因为鼠龄太大了。细胞活力其实挺好的，但就是不长瘤。有没有补救的办法呢？加上基质胶会不会有帮助？有经验的朋友们，求分享一下你们的经验吧！𐟙 现在真的是急需找到解决办法，不然实验就要泡汤了。希望大家能给我一些建议，或者分享一下你们之前遇到的类似情况是怎么解决的。谢谢大家了！𐟙Œ

基质胶的消毒和灭菌方法对细胞生长有什么影响？

如何制作漂亮的免疫荧光类器官图嘿，大家好！今天我想和大家分享一下如何做出超好看的免疫荧光类器官图。这个过程虽然有点繁琐，但绝对值得一试！让我们一起来看看吧！类器官收集 𐟌𑊩斥…ˆ，我们需要收集类器官。取出类器官培养板，用显微镜观察类器官的大小。等到类器官长到100-200左右的时候，就可以进行石蜡包埋了。用移液枪吸去培养液，加入等体积的预冷基础培养基。用润洗过的枪头（剪去尖端）轻轻划破或吹散基质胶和类器官的混合培养物，然后转移到1.5mL的离心管中，轻柔吹打几次，最后在冰上静置5分钟。接下来，300g，4℃，离心3分钟。你会看到培养基、基质胶和类器官沉淀从上至下分三层。如果基质胶去除不干净，可以再次用基础培养基重悬类器官离心后弃上清，直到基质胶完全去除。类器官固定、清洗 𐟧ꊥ›𚥮š类器官加入1mL 4% PFA到类器官沉淀悬液中，轻柔吹打使其混匀，然后在冰上或4℃静置固定1小时。固定结束后，300g，4℃离心5分钟，弃去上清。清洗类器官加入1mLPBS重悬类器官，300g，4℃离心5分钟，弃去上清。将类器官沉淀转移到60-70℃的水浴或金属浴中预热待用。琼脂糖包埋类器官 𐟧𔊥œ襾⧂‰中隔水加热至3%的琼脂糖彻底融化，操作时避免琼脂糖溶液沸腾，否则会导致液体损失及浓度改变。加入30-50已完全溶解的琼脂糖溶液，用润洗过的枪头（剪去尖端）重悬类器官沉淀，冰上放置30分钟，待其凝固。石蜡包埋、切片、脱蜡至水 𐟔ꊨ🙤𘀦�œ‰点复杂，但很重要。简单来说，就是将凝固的琼脂糖包埋的类器官切片，然后进行石蜡包埋、切片、脱蜡至水。免疫染色 𐟌ˆ 高温抗原修复封闭：用5%BSA封闭30分钟；孵育一抗：每张玻片滴加足够量的稀释好的一抗并放入湿盒，4℃孵育过夜；孵育二抗：第二天加荧光二抗。PBST浸洗爬片3次，每次3分钟。吸水纸吸干爬片上多余液体后滴加稀释好的荧光二抗，湿盒中20-37℃孵育1小时。PBS浸洗爬片3次，每次3分钟； DAPI染核：滴加DAPI避光孵育5分钟，对标本进行染核。PBS 5分钟㗴次洗去多余的DAPI；封片观察 𐟔튧”襐𘦰𔧺𘥐𘥹𒧈짉‡上的液体，用含抗荧光淬灭剂的封片液封片，然后在荧光显微镜下观察并采集图像。好了，这就是制作免疫荧光类器官图的全过程啦！希望对大家有帮助！如果有任何问题或需要更多细节，欢迎留言讨论哦！

《基质胶的消毒和灭菌方法对细胞生长有什么影响？》今天咱们来聊聊基质胶的消毒和灭菌方法，对细胞生长所产生的影响。而且辐射还可能影响基质胶里生长因子等活性成分的稳定性，间接影响细胞生长。网页链接

Transwell实验详解，测侵袭！体外Transwells小室趋化侵袭实验——24孔趋化小室(孔径8um) 𐟔 实验原理在Transwell实验中，上室种植肿瘤细胞，下室加入FBS或特定趋化因子。肿瘤细胞会向营养成分高的下室移动。与肿瘤细胞迁移实验不同，此实验在上室侧铺上一层基质胶，模拟体内细胞外基质。细胞欲进入下室，需先分泌基质金属蛋白酶（MMPs）降解基质胶，才能通过聚碳酸酯膜。计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的侵袭能力。 𐟓 实验方法大致流程 1️⃣ 将冻存的Matrigel胶在4℃冰箱中过夜解冻，使其液态化。 2️⃣ 用不含10%胎牛血清的RMPI1640培养液稀释Matrigel胶，按1:1的比例在冰水浴中混匀。 3️⃣ 将稀释后的Matrigel胶均匀铺在聚碳酸酯膜上，覆盖整个膜面，置入37℃恒温箱中静置30min-1h使其凝固形成基质屏障胶。 4️⃣ 将转染后收集的细胞或对照组细胞进行常规胰酶消化、PBS冲洗3遍。 5️⃣ 用不含10%胎牛血清的完全培养液重悬细胞，进行细胞计数并调整细胞密度至2.5㗱0^5个/mL。 6️⃣ 将形成基质屏障胶的膜用不含10%胎牛血清的RMPI1640培养液进行浸润水化。于上室加入处理后的细胞，24孔板小室一般加200⵬。 7️⃣ 在下室内加入含有20%优质胎牛血清的RMPI1640培养液进行细胞侵袭诱导，每个组设3个平行复孔。 8️⃣ 将小室在37℃、5%的CO2恒温培养箱中培养24h后，倒弃上室中的细胞及液体，并用PBS冲洗2遍。 9️⃣ 将上室内的Matrigel基质屏障胶用棉签擦去，滤膜上层贴壁生长但未能穿过膜的细胞。将上室置于95%乙醇室温固定30min。 𐟔Ÿ 将固定后的膜经结晶紫染色10~15min后，蒸馏水冲洗终止染色。 1️⃣1️⃣ 显微镜下随机挑选5个低倍视野(200X)的细胞计数，以其穿膜细胞的平均数作为细胞侵袭能力的参数，计算平均值。通过以上步骤，你可以评估肿瘤细胞的侵袭能力，进一步了解肿瘤细胞的生物学特性。

𐟧즞„建类器官（胃）的奇妙之旅𐟚€ 𐟔즃𓨦构建一个与真实胃相似的类器官吗？采用酶消化法是个不错的选择！首先，从人胃肠道或相关病变组织中获取上皮组织。𐟒ꦎ姝€，利用酶解技术将这些组织分散成细胞悬液。𐟧꧄𖥐Ž，将这些上皮细胞与特制的基质胶混合，创造出3D培养环境。𐟌𑦜€后，加入专为胃肠道上皮细胞设计的培养基，让它们在这个人工环境中生长、分化。𐟍€经过一段时间的培养，你就能得到一个与真实胃肠道上皮组织结构及功能相似的活组织类器官啦！𐟎‰这不仅是科研上的重大突破，更是医学领域的一大飞跃。𐟌Ÿ

𐟐� 肺原位肿瘤模型构建的两种方法𐟓– 𐟔 在实验室中，我们成功建立了两种肺原位肿瘤模型，以下是详细的构建方法： 𐟓Œ 方法一：尾静脉注射接种肺转移模型 𐟔 适用于小鼠黑色素瘤等易于观察的鼠源细胞，也适用于免疫相关的肺模型。 𐟓Š 收集对数生长期的细胞，细胞液浓度应在5㗱0^5～1㗱0^6/ml之间。 ❄️ 操作过程中，细胞液应在冰上进行，以避免细胞聚球。 𐟒‰ 注射时，细胞液应缓慢推注，以减少肺栓塞的风险。 𐟕 约一周后，模型即可形成。 𐟒ᠥ悦žœ细胞中加入了LUC，可以通过活体成像进行观察。 𐟓Š 本实验室的成功率超过90%。 𐟓Œ 方法二：胸腔原位注射接种模型 𐟔 技术难度较高，对操作者的手法要求严格。 𐟔砩€‚用于人源细胞裸鼠接种，也适用于鼠源细胞的大/小鼠模型。 𐟓Š 收集对数生长期的肺肿瘤细胞，用2:1的N.S.:基质胶0℃液体制成细胞悬液，浓度不少于1㗱0^7/ml。 𐟔ꠥ𐆥𐏩𜠩𚻩†‰，暴露胸腹部并固定于手术台上。 𐟒‰ 用微量注射器抽取制备好的细胞悬液，在小鼠仰卧位左侧4～5肋间穿刺接种。 𐟔„ 穿刺深度以进入胸前后悬空感消失，略有阻力且轻微下压后有微微回弹感为宜。 𐟕 推注完毕后，停留8～10秒，轻轻抽离注射器，并用消毒好的棉签轻轻按压注射位10秒。 𐟔„ 将术后小鼠放入保温笼中复苏。 𐟒ᠥ悦žœ细胞中加入了LUC，可以通过活体成像进行观察。 𐟓Š 约7～10天后，模型即可形成。 𐟓Š 本实验室的成功率在80～85%之间。 𐟔 通过这两种方法，我们能够有效地构建鼠肺原位肿瘤模型，为肿瘤研究提供有力的支持。

细胞迁移与侵袭实验全攻略 𐟔젥ꌧ›„ 通过 Transwell 小室实验，研究细胞的迁移与侵袭能力，以及不同因素对细胞该行为的影响。 𐟓– 实验原理细胞迁移与侵袭实验将 Transwell 小室放入培养板中，小室内为上室，培养板内为下室，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。聚碳酸酯膜具有通透性，下层培养液中的成分可影响上室内的细胞。通过使用不同孔径和处理的聚碳酸酯膜，可进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等研究。 𐟧ꠥꌦ料可拍照显微镜 Transwell 小室（孔径 8） 24 孔板 BD 公司的 Matrigel 无血清 DMEM 含 1% 胎牛血清的 DMEM 和 1640 培养基 DMEM 完全培养基 1640 完全培养基（也可加到 20% 血清）无菌 PBS，棉签，胰酶，4% 多聚甲醛固定液或甲醇结晶紫染液（0.1% (g/ml) PBS 结晶紫） 𐟓 实验步骤基质胶铺板：用 BD 公司的 Matrigel 按 1:8 稀释，包被 Transwell 小室底部膜的上室面，置 37℃ 30min 使 Matrigel 聚合成凝胶。使用前进行基底膜水化。制备细胞悬液：让细胞撤血清饥饿 12 - 24h，去除血清影响（非必须步骤）。消化细胞，终止消化后离心弃去培养液，用 PBS 洗 1 - 2 遍，用含 BSA 的无血清培养基重悬，调整细胞密度至 5㗱0⁵/ml。接种细胞：取细胞悬液 100 加入 Transwell 小室。在 24 孔板下室加入 600 含 20% 血清的培养基，注意避免产生气泡。常规培养 12 - 48h（依癌细胞侵袭能力而定，24h 较常见）。结果统计：取出 Transwell 小室，弃去孔中培养液，用无钙的 PBS 洗 2 遍，甲醇固定 30 分钟，将小室适当风干。用 0.1% 结晶紫染色 20 min，用棉签轻轻擦掉上层未迁移细胞，用 PBS 洗 3 遍。在 400 倍显微镜下随机五个视野观察细胞，记数。 𐟓Š 实验结果记录显微镜下观察到的细胞迁移与侵袭的数量及分布情况。 𐟒젥ꌨ分析实验结果，探讨细胞迁移与侵袭能力的变化原因，以及实验过程中可能存在的误差和影响因素。

Transwell侵袭实验常见问题解答 1. 𐟕’ 侵袭时间应该多久？侵袭时间通常在24-48小时之间，具体时间可以根据细胞的转移能力来调整。过长的时间可能会引起细胞增殖的质疑。 𐟔젥悤𝕥ˆ䦖�ˆ化细胞完成？使用胰酶消化后，在显微镜下观察，当细胞变圆时表示消化完成。最后用含有血清的培养基终止消化。 𐟧𔠩“𚨃𖦗𖥦‚何避免气泡？铺胶时若产生气泡，可以用枪头戳破，然后左右摇摆使胶铺平。 𐟒砧耩‡Š后的胶会不会凝固？ 1:8稀释的胶不会凝固，会形成一层凝胶薄膜。在显微镜下可以看到黑点旁边的黄色圆点。 𐟓 基质胶的浓度稀释比例是多少？稀释比例不一定要1:8，可以根据细胞穿透情况调整，选择一个适中的比例。 𐟔젩“𚧻†胞前液体穿过小室进入下室的影响？基底膜水化后，检查是否有液体穿过小室进入下室。如果没有，则可以接种细胞；如果有，可能实验结果不准确。 𐟓‰ 小室放入24孔板时产生气泡的影响？下层培养液和小室间常会有气泡产生，一旦产生气泡，下层培养液的趋化作用就减弱甚至消失了。在种板时要特别留心，一旦出现气泡，要将小室提起，去除气泡，再将小室放进培养板。 𐟔⠦Ž姧细胞的数量多少最佳？具体实验时采用密度要自己摸索，因为不同细胞的侵袭能力不同。个人经验，细胞量过多，穿过膜的细胞会过多过快，如果最后用计数法统计结果的话将难以计数；而过少的话，可能还没到检测的时间点，所有的细胞都已穿过，因此最少也要保证在收样的时候，上室内还要有一定量的细胞存在。

细胞迁移与侵袭实验全攻略细胞迁移与侵袭实验是一种研究细胞行为的强大工具。通过将Transwel小室放入培养板中，可以模拟细胞在不同环境下的迁移和侵袭行为。以下是详细的实验步骤和注意事项： 𐟧ꠦ料准备显微镜：可拍照显微镜 Transwel小室：孔径8um，未包被胶的（Coste和Corning公司的也常用） 24孔板：与购买的Transwel小室相配套培养基：DMEM（含1%胎牛血清）和1640培养基完全培养基：DMEM和1640完全培养基（可加至20%血清）无菌PBS、棉签、胰酶、甲醇、结晶紫染液（0.1% (g/ml) PBS结晶紫） 𐟔砥ꌦ�ꤊ基质胶铺板使用BD公司的Matrigel，按1:8的比例稀释，包被Transwel小室底部膜的上室面，置于37℃30分钟使Matrigel聚合成凝胶。使用前进行基底膜水化。制备细胞悬液让细胞撤血清饥饿12-24小时，进一步去除血清的影响（这一步不是必须的）。消化细胞，终止消化后离心弃去培养液，用PBS洗1-2遍，用含BSA的无血清培养基重悬，调整细胞密度至5x105/ml。接种细胞取100细胞悬液加入Transwel小室。 24孔板下室一般加入600含20%血清的培养基。特别注意下层培养液和小室间常会有气泡产生，一旦产生气泡，下层培养液的趋化作用就减弱甚至消失了。在种板时要特别留心，一旦出现气泡，要将小室提起，去除气泡，再将小室放进培养板。培养细胞常规培养12-48小时（主要依细胞侵袭能力而定），24小时较常见。时间点的选择除了要考虑到细胞的侵袭力外，处理因素对细胞数目的影响也不可忽视。结果统计直接计数法：贴壁细胞计数，所谓的“贴”是指细胞穿过膜后，可以附着在膜的下室侧而不会掉到下室里面去。通过给细胞染色可在镜下计数细胞。取出Transwel小室，弃去孔中培养液，用无钙的PBS洗2遍，用甲醇固定30分钟，将小室适当风干。0.1%结晶紫染色20分钟，用棉签轻轻去掉上层未迁移细胞，用PBS洗3遍。400倍显微镜下随机五人视野观察细胞，记数。通过以上步骤，你可以观察到细胞的迁移和侵袭行为，并对其进行定量分析。

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