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matrigel新上映_matrigel基质胶是什么(2024年12月抢先看)

内容来源：中小站长动力网所属栏目：导读更新日期：2024-12-02

matrigel

𐟧즎⧴⨡€管生成的奥秘𐟒‰ 𐟔 你知道“血管生成”是什么吗？血管生成，也被称为血管新生，是生物体内新血管从已存在的血管中生长出来的过程。这个过程在组织修复、生长以及某些疾病如癌症中起着关键作用。𐟒ኊ𐟔젥悤𝕧 ”究“血管生成”？ 1️⃣ 免疫组织化学染色实验：通过检测组织切片中的特定血管标志物，如VEGF和CD31，来识别新生血管。 2️⃣ 免疫荧光染色实验：利用荧光标记抗体，在显微镜下直观地观察细胞和组织的血管结构。 3️⃣ 体外管状结构形成实验：通过在Matrigel上培养内皮细胞，评估其在体外形成类似血管结构的能力。 𐟒ᠨဧ”Ÿ成的研究不仅有助于理解生物体的生长和修复机制，还为医学研究和治疗提供了新的视角。通过这些实验方法，我们可以更深入地探索血管生成的奥秘，为医学进步贡献力量！𐟌Ÿ

裸鼠成瘤常见问题解答，避免实验失败！在进行裸鼠成瘤实验时，可能会遇到一些问题，以下是一些常见的解答： 𐟔 瘤子长不出来怎么办？可能是细胞状态不佳，活力不足，或者肿瘤细胞不易成瘤。可以尝试加入Matrigel辅助，增大接种量，或者更换细胞系。另外，如果小鼠周龄太大或者免疫排斥，建议使用免疫缺陷程度更大的小鼠（如Nod-scid小鼠或aNOG小鼠）。 𐟓‰ 肿瘤体积差异大是怎么回事？如果发现小鼠的肿瘤体积差异很大，可能是因为小鼠周龄不一致或者接种细胞量不同。建议重新进行实验分组。 𐟔„ 小鼠瘤子长起来又消失？肿瘤块先缩小后变大是很常见的现象，很可能是炎症反应。肿瘤细胞被小鼠自身吸收，继续观察几周后如果肿瘤细胞无法重新长出，建议更换小鼠。你们在实验过程中还遇到哪些问题呢？欢迎补充～

Transwell实验详解，测侵袭！体外Transwells小室趋化侵袭实验——24孔趋化小室(孔径8um) 𐟔 实验原理在Transwell实验中，上室种植肿瘤细胞，下室加入FBS或特定趋化因子。肿瘤细胞会向营养成分高的下室移动。与肿瘤细胞迁移实验不同，此实验在上室侧铺上一层基质胶，模拟体内细胞外基质。细胞欲进入下室，需先分泌基质金属蛋白酶（MMPs）降解基质胶，才能通过聚碳酸酯膜。计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的侵袭能力。 𐟓 实验方法大致流程 1️⃣ 将冻存的Matrigel胶在4℃冰箱中过夜解冻，使其液态化。 2️⃣ 用不含10%胎牛血清的RMPI1640培养液稀释Matrigel胶，按1:1的比例在冰水浴中混匀。 3️⃣ 将稀释后的Matrigel胶均匀铺在聚碳酸酯膜上，覆盖整个膜面，置入37℃恒温箱中静置30min-1h使其凝固形成基质屏障胶。 4️⃣ 将转染后收集的细胞或对照组细胞进行常规胰酶消化、PBS冲洗3遍。 5️⃣ 用不含10%胎牛血清的完全培养液重悬细胞，进行细胞计数并调整细胞密度至2.5㗱0^5个/mL。 6️⃣ 将形成基质屏障胶的膜用不含10%胎牛血清的RMPI1640培养液进行浸润水化。于上室加入处理后的细胞，24孔板小室一般加200⵬。 7️⃣ 在下室内加入含有20%优质胎牛血清的RMPI1640培养液进行细胞侵袭诱导，每个组设3个平行复孔。 8️⃣ 将小室在37℃、5%的CO2恒温培养箱中培养24h后，倒弃上室中的细胞及液体，并用PBS冲洗2遍。 9️⃣ 将上室内的Matrigel基质屏障胶用棉签擦去，滤膜上层贴壁生长但未能穿过膜的细胞。将上室置于95%乙醇室温固定30min。 𐟔Ÿ 将固定后的膜经结晶紫染色10~15min后，蒸馏水冲洗终止染色。 1️⃣1️⃣ 显微镜下随机挑选5个低倍视野(200X)的细胞计数，以其穿膜细胞的平均数作为细胞侵袭能力的参数，计算平均值。通过以上步骤，你可以评估肿瘤细胞的侵袭能力，进一步了解肿瘤细胞的生物学特性。

详细步骤protocol 1. 𐟓栤𜠤𛣥‰至少1小时，用Vitronectin XF™或Corning⮠Matrigel⮥Œ…被新的培养板。 𐟧Š 将mTeSR™ Plus恢复至室温（15-25Ⰳ），并进行等分。注意：不要在37Ⰳ水浴中加热mTeSR™ Plus。 𐟚🠧”豠mL的D-PBS清洗细胞。 𐟌€ 添加1 mL ReLeSR™并在1分钟内吸出，使集落暴露在余留的液体中。 𐟕’ 37Ⰳ孵育6-8分钟。最佳解离时间可能因所使用的细胞系而异。 𐟌𑠦𗻥Š 1 mL mTeSR™ Plus培养基。 𐟌€ 将培养板放在涡旋振荡器上，在室温下以1200 rpm涡旋2-3分钟。或一只手握住培养板，另一只手用力敲击板的侧面约30-60秒。 𐟧𔠤𝿧”赠mL血清移液管将分离的细胞聚集体转移到15 mL离心管中。 𐟌𑠥𐆧𛆨ƒž聚集体混合物以适当密度接种到含有mTeSR™ Plus培养基包被的培养板上。 𐟌᯸ 将培养板置于37Ⰳ培养箱中。多次快速地前后左右移动培养板，使细胞聚集体均匀分布。24小时内勿动培养板。聚集体分布不均匀可能会导致人ESC和iPSC的分化。 𐟔„ 根据需要进行更换培养基或进行传代。培养基可以每天或每隔一天更换一次。如间隔两天换液，请添加两倍体积的培养基。

Transwell实验，一文搞定！实验步骤： 𐟧Š 基质胶的准备：将保存在-20Ⰳ的基质胶转移到4Ⰳ冰箱中，让其过夜融化。使用前，用无血清培养基按1:2的比例稀释。 𐟧𜠥𐏥š„预处理：将24孔板和Transwell小室用1xPBS浸泡5分钟，以湿润小室。若进行侵袭实验，还需在小室中铺80 Matrigel胶，并在37Ⰳ培养箱中放置30分钟使其凝固。 𐟧젧𛆨ƒž的准备：用胰蛋白酶消化细胞，并用无血清培养液洗涤。然后，用含有1%FBS的培养基重悬细胞，计数并稀释至2x105细胞/mL（侵袭实验中为4x105细胞/mL）。将0.3mL细胞悬液接种到每个小室内，下层的24孔板中加入0.7mL含10%FBS的完全培养液，每组设3个复孔，置于37Ⰳ培养箱中培养24小时（侵袭实验中为48小时）。 𐟔„ 固定与染色：培养结束后，每孔加入1mL 4%多聚甲醛溶液，室温固定10分钟。然后，吸去固定液，用1xPBS洗涤一次，每孔加入1mL 0.5%结晶紫溶液，染色30分钟后用1xPBS洗三次，晾干。 𐟔 观察与计数：用棉签小心擦去Transwell小室内没有迁移的细胞，置于200x显微镜下观察，计数每个视野中的细胞数。 𐟓Š 统计分析：对实验数据进行统计分析。注意事项： 𐟚렩🥅气泡：将小室放入培养板时，要注意不要有气泡产生，因为气泡会减弱下层培养液的趋化作用。 𐟧𝠦“橙䦜꨿移细胞：用棉签小心擦去Transwell小室内没有迁移的细胞时，不能碰到已经穿膜的细胞。 𐟕𐯸 饥饿处理：对于难穿膜的细胞，可以用无血清培养基饥饿处理12-24小时。

细胞迁移与侵袭实验全攻略 𐟔젥ꌧ›„ 通过 Transwell 小室实验，研究细胞的迁移与侵袭能力，以及不同因素对细胞该行为的影响。 𐟓– 实验原理细胞迁移与侵袭实验将 Transwell 小室放入培养板中，小室内为上室，培养板内为下室，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。聚碳酸酯膜具有通透性，下层培养液中的成分可影响上室内的细胞。通过使用不同孔径和处理的聚碳酸酯膜，可进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等研究。 𐟧ꠥꌦ料可拍照显微镜 Transwell 小室（孔径 8） 24 孔板 BD 公司的 Matrigel 无血清 DMEM 含 1% 胎牛血清的 DMEM 和 1640 培养基 DMEM 完全培养基 1640 完全培养基（也可加到 20% 血清）无菌 PBS，棉签，胰酶，4% 多聚甲醛固定液或甲醇结晶紫染液（0.1% (g/ml) PBS 结晶紫） 𐟓 实验步骤基质胶铺板：用 BD 公司的 Matrigel 按 1:8 稀释，包被 Transwell 小室底部膜的上室面，置 37℃ 30min 使 Matrigel 聚合成凝胶。使用前进行基底膜水化。制备细胞悬液：让细胞撤血清饥饿 12 - 24h，去除血清影响（非必须步骤）。消化细胞，终止消化后离心弃去培养液，用 PBS 洗 1 - 2 遍，用含 BSA 的无血清培养基重悬，调整细胞密度至 5㗱0⁵/ml。接种细胞：取细胞悬液 100 加入 Transwell 小室。在 24 孔板下室加入 600 含 20% 血清的培养基，注意避免产生气泡。常规培养 12 - 48h（依癌细胞侵袭能力而定，24h 较常见）。结果统计：取出 Transwell 小室，弃去孔中培养液，用无钙的 PBS 洗 2 遍，甲醇固定 30 分钟，将小室适当风干。用 0.1% 结晶紫染色 20 min，用棉签轻轻擦掉上层未迁移细胞，用 PBS 洗 3 遍。在 400 倍显微镜下随机五个视野观察细胞，记数。 𐟓Š 实验结果记录显微镜下观察到的细胞迁移与侵袭的数量及分布情况。 𐟒젥ꌨ分析实验结果，探讨细胞迁移与侵袭能力的变化原因，以及实验过程中可能存在的误差和影响因素。

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