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荧光显微镜滤光片新上映_滤光片厂家排名(2024年11月抢先看)

内容来源：中小站长动力网所属栏目：导读更新日期：2024-11-28

荧光显微镜滤光片

𐟔찟“š 显微镜大揭秘！ 𐟔 探索细胞世界的窗口——显微镜，你了解多少？ 𐟌Ÿ 目前最常用的显微镜有三种：普通倒置显微镜、荧光显微镜和激光共聚焦显微镜。 𐟌𑠦™š倒置显微镜是细胞房的必备品，低倍镜观察细胞增殖，高倍镜则揭示细胞形态和污染情况。 ✨ 荧光显微镜比倒置显微镜更先进，增加了荧光光源，可配合电脑成像。不同滤光片下，细胞呈现不同色彩，如蓝、绿或红光。 𐟒Ž 激光共聚焦显微镜结构更精细，图像清晰度极高。200倍及以下可直接拍摄，400倍以上则需使用油镜。光源和放大倍数均可计算机设置，适用于三维结构如肿瘤球的拍摄。 𐟔砨𐃧„楰技巧：当粗准焦螺旋无法对焦时，可寻找参照物如96孔板边缘进行调焦，再用细准焦螺旋微调至清晰。 𐟓– 现在，你是否对显微镜有了更深入的了解呢？

四步搞定免疫荧光染色，简单又高效！想要做免疫荧光染色，但总觉得步骤太复杂？别担心，今天我来分享一个超级简单的四步免疫荧光染色法，让你轻松搞定！我们会在ibidi的Slide 8孔不可移除腔室载玻片中培养和染色贴壁细胞，以大鼠成纤维细胞为例，用多聚甲醛固定，再用线粒体染色MitoTracker对细胞核进行复染。当然，你也可以根据自己的需求使用其他固定技术和抗体染色。材料准备 Rat fibroblasts（细胞系） Slide 8 well, ibiTreat（ibidi, 80826） 2% Paraformaldehyde（PBS配制） 0.1% Triton⮠X-100（Fluka） 1% BSA in PBS（封闭液） 50 nM MitoTracker Green（Life Technologies） 0.1 /ml DAPI（Sigma）荧光显微镜（倒置），带有适当的滤光片组步骤一：培养细胞首先，在无菌条件下打开ibidi的Slide 8孔载玻片，放在Slide Rack或者适当的平面上。然后，准备细胞悬液（5 x 10 4细胞/ml），每个孔中加入300。盖上盖子后，把载玻片放入培养箱（37Ⰳ; 5% CO2），让细胞附着。培养至少3小时或者过夜。如果需要更长时间的细胞培养，建议几天后进行中等程度的交换。步骤二：固定、透化和封闭用细胞培养抽吸装置从孔中吸出细胞培养基。用Dulbecco PBS冲洗细胞，方法是将300缓慢加入每个孔。用约150 2% paraformaldehyde固定细胞20分钟。 20分钟后吸出液体，加入约150的0.1% Triton⮠X-100，10分钟后吸出液体，再用300 BSA封闭液洗涤细胞。步骤三：染色准备染色和抗体溶液。用150 DAPI溶液在室温下培养30分钟。用300 BSA封闭溶液洗涤细胞两次。用150 MitoTracker溶液培养45分钟。用300 BSA封闭溶液洗涤细胞两次。吸出溶液，逐滴添加约150的ibidi封片剂。步骤四：成像最后，在荧光显微镜下用合适的滤光片组观察细胞，你还可以选择用ibidi浸油来观察细胞。就这么简单！四步搞定免疫荧光染色，赶紧试试吧！𐟒ꀀ

荧光原位杂交（FISH）技术全解析荧光原位杂交（Fluorescence In Situ Hybridization，FISH）是一种利用荧光标记的核酸探针与目标序列进行杂交的技术。通过荧光显微镜观察荧光信号的位置和强度，可以实现对基因或染色体的精确检测和定位。 𐟔 原理 FISH技术基于核酸互补配对的特性。通过设计与目标DNA或RNA序列互补的探针，在特定条件下使探针与目标序列结合，再通过荧光显微镜观察杂交的结果。该技术可以实现单细胞水平的精确检测，具有高灵敏度和高特异性，因此在检测染色体异常、基因扩增、基因重排等方面有独特的优势。 𐟓 操作步骤样品制备样品制备是FISH技术中至关重要的一步，直接影响杂交的效果和信号的清晰度。根据研究目的的不同，样品可以是组织切片、细胞涂片或培养细胞。需要将样品固定在载玻片上，通常使用甲醇和乙醇混合液进行固定。固定的目的是保持细胞形态和核酸结构，同时使细胞膜通透，以便探针能够进入细胞内与目标序列结合。探针标记探针是FISH实验的关键组件，通常是寡核苷酸或cDNA。为了实现荧光检测，探针需要通过化学方法标记荧光染料，如FITC、Cy3、Cy5等。标记后的探针能够与目标核酸序列特异性结合，通过荧光显微镜观察探针位置来确定目标序列的存在和位置。杂交杂交是FISH技术的核心步骤。在杂交之前，样品通常需要经过预处理，包括DNA变性（通常在70-75Ⰳ的温度下处理，以使双链DNA解链成单链）和探针变性。变性后的探针与样品共同孵育，通常在湿润的条件下孵育数小时至过夜，使探针与样品中的目标序列结合。杂交后洗涤为了去除未结合的探针，需要在杂交后进行严格的洗涤步骤。这一步骤非常重要，可以显著减少非特异性结合的背景信号。洗涤通常在含有盐溶液的缓冲液中进行，具体的洗涤条件（如温度和时间）需根据探针的长度和杂交温度来调整。荧光显微镜观察杂交后，样品会被转移到荧光显微镜下进行观察。通过特定的滤光片，能够看到探针标记的荧光信号。通过比较荧光信号的位置和强度，可以判断目标序列的位置、数量以及其在细胞中的分布情况。常见的FISH应用包括染色体核型分析、基因扩增检测、和染色体重排等。结果分析最后一步是对获得的图像进行分析。通常，FISH结果以图像形式呈现，研究人员通过图像分析软件进行定量分析，例如测量荧光强度、统计荧光点的数量等。这些数据能够为研究提供有力的支持，并帮助科学家们做出准确的判断和结论。

𐟔쥅‰学显微镜：细胞生物学的探索工具𐟔 光学显微镜是细胞生物学研究的重要工具之一。以下是几种常见的光学显微镜及其特点：相差显微镜𐟌ˆ 利用光线的干涉和行射特征，将相位差转变为振幅差，增强样品的明暗对比，从而观察无色透明样品。特殊构件：相差板和环状光阑，使相位差转变为振幅差，增强样品的明暗对比。无需染色，可观察活细胞及细胞器动态。微分干涉显微镜𐟔 以平面偏光为光源，将样品厚度差转变为振幅差，增强样品的明暗对比。适合观察活细胞内较大的细胞器。分辨率比普通复式显微镜提高一个数量级。录像增差显微镜𐟎劥œ襾†干涉显微镜的基础上引入计算机辅助录像，观察记录活细胞内细胞器活动。荧光显微镜𐟌Ÿ 利用短波长电磁波为光源，激发样品辐射荧光，对细胞内特异性蛋白质进行定性与定位研究。特殊构件：石英透镜和滤光片系统，包括激发滤片和阻断滤片。优点：主要用于定性、定位研究细胞内特异性蛋白质，可观察活细胞。缺点：无法排除来自样品焦平面以外的荧光，使得图像的反差与分辨率降低。通过这些光学显微镜技术，我们可以更深入地了解细胞的内部结构和动态变化。

荧光原位杂交（FluorescenceInSituHybridization，FISH）是一种利用荧光标记的核酸探针与目标序列进行杂交的技术，通过荧光显微镜观察荧光信号的位置和强度，从而实现对基因或染色体的精确检测和定位。 FISH技术的原理是基于核酸互补配对的特性，通过设计与目标DNA或RNA序列互补的探针，在特定条件下使探针与目标序列结合，再通过荧光显微镜观察杂交的结果。该技术可以实现单细胞水平的精确检测，具有高灵敏度和高特异性，因此在检测染色体异常、基因扩增、基因重排等方面有独特的优势。荧光原位杂交的操作步骤样品制备样品制备是FISH技术中至关重要的一步，直接影响杂交的效果和信号的清晰度。根据研究目的的不同，样品可以是组织切片、细胞涂片、或培养细胞。需要将样品固定在载玻片上，通常使用甲醇和乙醇混合液进行固定。固定的目的是保持细胞形态和核酸结构，同时使细胞膜通透，以便探针能够进入细胞内与目标序列结合。探针标记探针是FISH实验的关键组件，通常是寡核苷酸或cDNA。为了实现荧光检测，探针需要通过化学方法标记荧光染料，如FITC、Cy3、Cy5等。标记后的探针能够与目标核酸序列特异性结合，通过荧光显微镜观察探针位置来确定目标序列的存在和位置。杂交杂交是FISH技术的核心步骤。在杂交之前，样品通常需要经过预处理，包括DNA变性（通常在70-75Ⰳ的温度下处理，以使双链DNA解链成单链）和探针变性。变性后的探针与样品共同孵育，通常在湿润的条件下孵育数小时至过夜，使探针与样品中的目标序列结合。杂交后洗涤为了去除未结合的探针，需要在杂交后进行严格的洗涤步骤。这一步骤非常重要，可以显著减少非特异性结合的背景信号。洗涤通常在含有盐溶液的缓冲液中进行，具体的洗涤条件（如温度和时间）需根据探针的长度和杂交温度来调整。荧光显微镜观察杂交后，样品会被转移到荧光显微镜下进行观察。通过特定的滤光片，能够看到探针标记的荧光信号。通过比较荧光信号的位置和强度，可以判断目标序列的位置、数量以及其在细胞中的分布情况。常见的FISH应用包括染色体核型分析、基因扩增检测、和染色体重排等。结果分析最后一步是对获得的图像进行分析。通常，FISH结果以图像形式呈现，研究人员通过图像分析软件进行定量分析，例如测量荧光强度、统计荧光点的数量等。这些数据能够为研究提供有力的支持，并帮助科学家们做出准确的判断和结论

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